大豆疫霉琥珀酸脫氫酶相關(guān)基因PsSDHA的克隆與功能分析.pdf

1、大豆疫霉（Phytophthora sojae）近年來逐漸成為大豆的一種毀滅性病害，導(dǎo)致大豆的嚴重減產(chǎn)，給國內(nèi)的油料作物生產(chǎn)帶來嚴重的影響，影響了經(jīng)濟的穩(wěn)定發(fā)展。隨著大豆疫霉的全基因組測序完成，大豆疫霉的轉(zhuǎn)化體系和 RNAi干擾技術(shù)的逐漸成熟，大豆疫霉成為了研究卵菌功能基因的模式物種。
　　琥珀酸脫氫酶(Succinatedehydrogenase,SDH)，是三羧酸循環(huán)（TCA）的關(guān)鍵酶，是TCA循環(huán)中唯一一個嵌入到膜上的多亞基

2、酶，在生物體中具有重要的作用，是連接氧化磷酸化和電子傳遞的樞紐，為生物體的需氧和產(chǎn)能呼吸鏈提供電子。琥珀酸脫氫酶是多亞基調(diào)控的酶，其中A亞基包含：一個共價連接的FAD、琥珀酸的結(jié)合位點、輔酶Q的結(jié)合位點；B亞基包含有三個鐵硫族：2Fe-2s、3Fe-4s、4Fe-4s。琥珀酸脫氫酶的活性一般可以做為三羧酸循環(huán)的運行程度指標，是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶，而TCA循環(huán)為大豆疫霉整個生長過程提供能量。
　　本實驗通過擴增大豆疫霉中琥珀酸脫氫酶

3、 A亞基中氨基酸殘基的保守編碼基因序列，構(gòu)建了PsSDHA的沉默表達載體，利用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體穩(wěn)定轉(zhuǎn)化實驗獲得了該基因的沉默突變菌株。通過 qRT-PCR實驗篩選出具有良好的沉默抑制效果的沉默突變菌株A1和A3。
　　通過沉默突變菌株的表型分析得出：在10％V8固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，沉默突變體的生長情況明顯較模式菌株6497緩慢；在10%V8液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，沉默突變菌株菌絲形態(tài)發(fā)生突變，模式野生菌株6497的菌絲較細長，分叉少，