基因突變技術(shù)提高phyA植酸酶在畢赤酵母中表達(dá)量及熱穩(wěn)定性的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究在對(duì)本課題組已注冊(cè)的植酸酶phyA基因核苷酸序列及氨基酸序列分析的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)phyA基因進(jìn)行同義突變、定點(diǎn)突變以及結(jié)構(gòu)延伸突變，獲得在畢赤酵母中高效表達(dá)并且熱穩(wěn)定性良好的植酸酶，其結(jié)果主要如下：　　1、對(duì)來(lái)源于本課題組自主分離的黑曲霉N25(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA(GenBank：基因注冊(cè)號(hào)為AF218813，蛋白質(zhì)序列號(hào)為AAF25481)進(jìn)行PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變?！?/p>

2、　2、采用反向長(zhǎng)距離PCR技術(shù)對(duì)上述重組酵母pp-Npm-8的植酸酶突變基因phyAm進(jìn)行PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變，即將植酸酶43位的苯丙氨酸替換為酪氨酸(F43Y)，將其354，358位的異亮氨酸、亮氨酸分別替換為甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F)，得到了兩個(gè)突變體pp-Npm-1(F43Y)及pp-Npm-2(I354M,L358F)。　　3、將上述重組酵母pp-Npm-8的植酸酶突變基因phyAm重組于大腸桿菌表達(dá)載體pE

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