晚期NSCLC患者EGFR-TKI治療過(guò)程中血清多肽變化及其臨床意義的探索性研究.pdf

1、背景：經(jīng)過(guò)大量的全球多中心臨床研究證明，表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor tyrosine kinase inhibitors，EGFR-TKI)已奠定了其在表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)突變型非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)患者中的一線治療地位。然而，大部分EGFR-TKI獲益

2、患者在治療一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)繼發(fā)性耐藥導(dǎo)致治療失敗。為突破這一臨床治療瓶頸，需要在不斷闡明EGFR-TKI耐藥機(jī)制的基礎(chǔ)上找到更好的指導(dǎo)治療方案的分子學(xué)標(biāo)志物。
　　相對(duì)于傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物及基因突變檢測(cè)，腫瘤蛋白組學(xué)方法構(gòu)建的差異多肽診斷模型，包含更全面的腫瘤生物學(xué)信息。磁珠輔助基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight ma

3、ss spectrometry,MALDI-TOF-MS）是目前用于腫瘤蛋白組學(xué)分析的核心技術(shù)。本研究旨在使用MALDI-TOF儀器從角度觀察NSCLC患者接受EGFR-TKI治療中的血清多肽變化，已期為目前的組織學(xué)、血液學(xué)基因?qū)W檢測(cè)結(jié)果提供補(bǔ)充和新的視角。
　　第一部分
　　目的：本研究旨在應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析離子化-時(shí)間飛行質(zhì)譜儀檢測(cè)NSCLC患者在接受EGFR-TKI治療過(guò)程中血清多肽的變化并探索其臨床意義。
　

4、　方法：
　　1.收集34例NSCLC患者使用EGFR-TKI治療前、最佳療效時(shí)及疾病進(jìn)展后自身配對(duì)的血清樣本102份；
　　2.本研究每例患者采血3次，分別為：(1)入組口服TKI治療前;（2）最佳療效時(shí)：臨床評(píng)價(jià)部分緩解（partial response，PR）或疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）時(shí)所留取的血液標(biāo)本；（3）疾病進(jìn)展后：臨床評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展（progressive disease,PD）后所留取的血

5、液標(biāo)本；
　　3.采用納米磁珠提取血清中的多肽，之后經(jīng)過(guò)MALDI-TOF-MS儀器檢測(cè)，得到質(zhì)譜的數(shù)據(jù)使用CPT統(tǒng)計(jì)軟件分析得出多肽圖譜；
　　4.將所得的差異多肽峰分別與PFS、OS及EGFR突變情況進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　1.34例接受EGFR-TKI治療的患者無(wú)完全緩解（complete response，CR）患者，部分緩解（partial response,PR）11例，疾病穩(wěn)定（stabl

6、e disease,SD）23例，中位無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）為8.0個(gè)月，中位總生存期OS為11.4個(gè)月；
　　2.對(duì)TKI治療的三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的血清進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，結(jié)果顯示三個(gè)時(shí)間點(diǎn)多肽指紋圖譜均不相同；
　　3.配對(duì)分析最佳療效時(shí)與基線時(shí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)CPT軟件共鑒定出差異多肽峰87個(gè)，篩選出兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰1個(gè)；疾病進(jìn)展時(shí)與基線時(shí)

7、共鑒定出差異多肽峰96個(gè)，篩選出兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異
　?。≒＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰3個(gè)；最佳療效時(shí)與疾病進(jìn)展時(shí)共鑒定出差異多肽峰115個(gè)，篩選出兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001、AUC≥0.9）的多肽峰4個(gè)。
　　結(jié)論:NSCLC患者在EGFR-TKI治療過(guò)程中血清蛋白存在著動(dòng)態(tài)變化，但鑒于本研究的病例數(shù)有限，初步鑒定出的差異多肽與治療獲益及疾病耐藥的具體關(guān)系仍需在更大樣本的基礎(chǔ)上進(jìn)行驗(yàn)證。
　　第二

8、部分
　　目的：本部分通過(guò)使用MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)分析兩組NSCLC患者接受EGFR-TKI治療前后血清蛋白變化，旨在觀察對(duì)于EGFR-TKI反應(yīng)不同兩組患者出現(xiàn)耐藥后的血清多肽差異的不同。
　　方法：收集49例晚期NSCLC患者EGFR-TKI治療前后自身配對(duì)的血清樣本98份，每名患者采血時(shí)間為EGFR-TKI治療前即基線和療效評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展后。統(tǒng)計(jì)所有患者PFS后計(jì)算出中位PFS，根據(jù)其長(zhǎng)短將患者分為短PFS組與長(zhǎng)P

9、FS組。采用磁珠磁珠提取血清中的多肽，之后采用MALDI-TOF-MS儀器檢測(cè)，得到質(zhì)譜的數(shù)據(jù)使用CPT統(tǒng)計(jì)軟件分析得出多肽圖譜。
　　結(jié)果:整體分析49例患者治療前后組自身配對(duì)差異多肽，兩組數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件得出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）的差異多肽峰16個(gè)。長(zhǎng)PFS組的24例樣本中，治療前后組自身配對(duì)聚類(lèi)分析得出兩組數(shù)據(jù)交叉確認(rèn)值94.44％，區(qū)別率95.45%均為最高。兩組數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析得出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）的

10、差異多肽峰20個(gè)。短PFS組的25例樣本治療前后組自身配對(duì)聚類(lèi)分析得出兩組數(shù)據(jù)交差驗(yàn)證值68.10%，識(shí)別率87.87%。后使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件未找到兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異多肽峰。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)在EGFR-TKI治療的長(zhǎng)PFS組NSCLC患者中，治療前后可鑒定出差異多肽，推測(cè)其與TKI耐藥或疾病進(jìn)展相關(guān)。而在短PFS組中，EGFR-TKI治療前后未鑒定出差異多肽。但鑒于本研究的病例數(shù)有限，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證及深