P38絲裂原活化蛋白激酶途徑介導(dǎo)鈉激活鉀離子通道(KNa)參與坐骨神經(jīng)痛炎癥機制的研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　第一部分:坐骨神經(jīng)痛患者血清中抗炎和促炎細胞因子的表達
　　目的:坐骨神經(jīng)痛與血清中炎癥細胞因子的差異性表達有關(guān)，但具體機制尚未完全闡明。本研究，將重度坐骨神經(jīng)痛患者的血清促炎細胞因子和抗炎細胞因子表達水平，與輕度坐骨神經(jīng)痛和健康受試者的血清水平進行比較，試圖發(fā)現(xiàn)坐骨神經(jīng)痛機制的表象規(guī)律。
　　方法:在這項前瞻性研究中，檢測58例重度坐骨神經(jīng)痛，50例輕度坐骨神經(jīng)痛患者和30例健康受

2、試者血清中的促炎(白細胞介素-6，8和腫瘤壞死因子-α)和抗炎細胞因子(白細胞介素-4，10)表達水平。對入組患者使用功能障礙指數(shù)量表和Short-36(SF-36)問卷確定身心健康狀態(tài)。最后計算從調(diào)查問卷中獲得的評分與血清細胞因子水平之間的相關(guān)性。根據(jù)VAS評分分成兩組:重度坐骨神經(jīng)痛組(VAS＞3分)和輕度坐骨神經(jīng)痛組(VAS≤3分)，健康受試者作為對照組。
　　結(jié)果:三組都能檢測出白細胞介素-6，重度坐骨神經(jīng)痛患者的中位數(shù)水

3、平高于輕度坐骨神經(jīng)痛組(P=0.02)和對照組(P=0.03)。坐骨神經(jīng)痛患者的白細胞介素-8中位數(shù)水平高于對照組(P=0.001，重度坐骨神經(jīng)痛組vs對照組;P=0.02，輕度坐骨神經(jīng)痛vs對照組)。重癥坐骨神經(jīng)痛組的腫瘤壞死因子-α蛋白值高于輕度坐骨神經(jīng)痛組(P＜0.01)和對照組(P＜0.01)。與對照組相比，輕度坐骨神經(jīng)痛的白細胞介素-4中位數(shù)水平高達2.5倍(P＜0.01)，重度坐骨神經(jīng)痛患者(P=0.012)高出約2倍。與重

4、度坐骨神經(jīng)痛(P＜0.01)和對照組相比，輕度坐骨神經(jīng)痛患者的白細胞介素-10表達水平顯示出較高的趨勢(P＜0.01)。功能障礙指數(shù)與白細胞介素-6(r=0.394，P=0.013)，腫瘤壞死因子-α(r=0.629，P＜0.001)和白細胞介素-10(r=-0.415，P=0.009)顯著相關(guān)。功能障礙指數(shù)與白細胞介素-4無顯著相關(guān)性(r=-0.174，P=0.29)和白細胞介素-8(r=-0.133，P=0.418)。
　　結(jié)

5、論:炎癥細胞因子差異性的表達可能參與坐骨神經(jīng)痛的發(fā)生機制。促炎癥細胞因子與疼痛呈正相關(guān)性，抗炎癥細胞因子與疼痛呈負相關(guān)性。
　　第二部分:腫瘤壞死因子-α通過p38 MAPK激活途徑調(diào)節(jié)大鼠的背角神經(jīng)元中鈉激活的鉀通道SLICK
　　目的:脊髓背角(Dorsal horn，DH)是處理和傳播疼痛感覺的綜合中心。離子通道表達的異常變化可增強疼痛相關(guān)的DH神經(jīng)元的興奮性。鈉激活鉀(KNa)通道在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達;然而，關(guān)于

6、大鼠DH神經(jīng)元是否表達SLICK通道蛋白的研究尚未有報道，并且SLICK面對炎癥環(huán)境的直接反應(yīng)和介導(dǎo)這種反應(yīng)的潛在信號通路尚未被闡明。
　　方法:本實驗利用腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)誘導(dǎo)新生鼠的背角神經(jīng)元細胞后，檢測鈉激活鉀通道的電流電壓，蛋白和基因的變化。然后，觀察并分析p38抑制劑SB202190能否拮抗這些變化，及其潛在機制。
　　結(jié)果: TNF-α抑制總外向鉀電流I

7、K和KNa電流，并能降低放電適應(yīng)能力。然而，這種變化能被p38抑制劑SB202190抵消，從而表明通過p38絲裂原激活蛋白激酶途徑調(diào)節(jié)SLICK通道活性。無論是腫瘤壞死因子-α還是SB202190對SLICKmRNA均未產(chǎn)生變化，MTT實驗結(jié)果顯示使用SB202190與TNF-α組合對DH神經(jīng)元的生存能力沒有影響。說明研究發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子-α的調(diào)控作用機制不在通道門控的水平，而是在可能的翻譯后修飾水平。
　　結(jié)論:TNF-α在翻譯

8、后修飾的層面，通過激活p38絲裂原激活蛋白激酶途徑調(diào)控大鼠背角神經(jīng)元中的鈉激活鉀通道SLICK。
　　第三部分:p38 MAPK途徑介導(dǎo)KNa通道參與坐骨神經(jīng)痛機制的體內(nèi)研究
　　目的:探討p38 MAPK抑制劑能否阻止自體髓核移植模型建立的異常性疼痛的進展或逆轉(zhuǎn)該病理過程;以及p38MAPK抑制劑用藥對大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)和脊髓背角中鈉激活的鉀離子通道的蛋白和基因表達變化影響。
　　方法:將SD大鼠隨機分為正常組、假手

9、術(shù)組以及自體髓核移植組。觀察記錄各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)和脊髓背角的鈉激活鉀通道蛋白及基因的表達，大鼠的機械、熱痛閾值。在自體髓核移植組中，給予三種濃度的p38MAPK抑制劑SB202190(0.3mg/kg，1.0mg/kg，3.2mg/kg)，生理鹽水作為對照，觀察給藥后大鼠機械、熱痛閾值以及鈉激活鉀通道蛋白基因的變化，將所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:自體髓核移植組的大鼠的機械和熱痛閾值，與正常組和假手術(shù)組，在每個術(shù)后時間點相比

10、均顯著降低(P＜0.05)。SLICK mRNA和SLACK mRNA在自體髓核移植大鼠中均明顯降低(P＜0.05)，與p38 mRNA的趨勢相反。蛋白免疫印跡分析顯示與基因變化一致。SB202190鞘內(nèi)注射時，大鼠的機械和熱痛敏行為在術(shù)后第2天明顯改善(P＜0.01)。SB202190也顯著提高鈉激活鉀通道蛋白表達水平，但對轉(zhuǎn)錄活動不起作用。
　　結(jié)論:抑制脊髓p38 MAPK通路激活，提高鈉激活的鉀離子通道的表達可改善坐骨神經(jīng)