microRNA155對骨髓間充質干細胞免疫調節(jié)功能影響的研究.pdf

1、目的：通過改變大鼠骨髓間充質干細胞（MSCs）中microRNA155的表達，研究其對MSCs免疫調節(jié)功能的影響。
　　方法：選取2周齡SD大鼠幼鼠脛骨、股骨提取MSCs，以流式細胞儀檢測細胞表面抗原CD29、CD44、CD34、CD45鑒定MSCs。選取生長良好的P3代MSCs,通過轉染miR155-mimics、mimics-nc或者miR155-inhibitor、inhibitor-nc，分別上調或者抑制miR-155表達

2、，轉染之后與大鼠脾臟單個核細胞共培養(yǎng)72h。利用流式細胞術檢測CD4+FOXP3+Treg細胞分化比例；熒光定量PCR分析Th1、Th2、Th17、Treg細胞特異性轉錄因子Tbx21，Gata3，Rorc，F(xiàn)oxp3的表達；檢測miR-155靶基因SOCS1基因表達情況，此外還利用transwell小室檢測轉染miR-155后的MSCs對大鼠脾臟單個核細胞遷移的影響。
　　結果：貼壁法分離得到P3代MSCs，鏡下觀察細胞長條狀，

3、呈極性生長，流式鑒定細胞表面抗原CD29、CD44表達陽性，CD34、CD45表達陰性；MSCs與脾細胞共培養(yǎng)72h后，流式檢測結果顯示：轉染miR155-mimics后，脾臟單個核細胞群中CD4+FOXP3+Treg細胞比例較脾臟單個核細胞單獨培養(yǎng)組明顯升高，且差異有統(tǒng)計學意義，P<0.001；轉染miR155-inhibitor后，脾臟單個核細胞群中CD4+FOXP3+Treg細胞比例較脾臟單個核細胞單獨培養(yǎng)組明顯降低，差異有統(tǒng)計學

4、意義，P<0.001。通過PCR分析發(fā)現(xiàn)：轉染miR155-mimics的MSCs可抑制T細胞中Tbx21、Rorc、SOCS1基因表達，而Gata3、Foxp3基因表達升高；轉染miR155-inhibitor的MSCs可引起T細胞中Tbx21、Rorc、SOCS1基因表達增高，而Gata3、Foxp3基因表達降低；通過Transwell小室誘導脾細胞遷移實驗發(fā)現(xiàn)，轉染miR155-mimics組脾臟單個核細胞遷移數(shù)量較空白對照組減少

5、，且差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01；轉染miR155-inhibitor組脾臟單個核細胞遷移數(shù)量較空白對照組增多，差異亦有統(tǒng)計學意義，P<0.01；轉染miR155-mimics組與轉染miR155-inhibitor組脾臟單個核細胞遷移數(shù)量差異明顯，P<0.001。
　　結論：
　　1、MSCs高表達microRNA155可促進T細胞向Th2、Treg細胞方向分化，抑制其向Th1、Th17細胞方向分化。
　　2、mi