血管壓迫脫髓鞘迷走神經(jīng)致神經(jīng)源性高血壓家兔模型的研究.pdf

1、目的：研究探索血管搏動(dòng)性壓迫頸動(dòng)脈鞘內(nèi)脫髓鞘迷走神經(jīng)導(dǎo)致的神經(jīng)源性高血壓(Neurogenic Hypertension，NH)家兔動(dòng)物模型的建立方法。通過(guò)實(shí)驗(yàn)闡明神經(jīng)源性高血壓的發(fā)病機(jī)制，在較為接近人類(lèi)生理的條件下形成神經(jīng)源性高血壓，為其形成和進(jìn)展提供實(shí)驗(yàn)學(xué)基礎(chǔ)和新的實(shí)驗(yàn)方法，為臨床選擇治療高血壓提供新的動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組：
　　將河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康家兔3

2、2只，雌雄不限，體重2.5-3.0Kg，隨機(jī)分為兩組，1.左側(cè)實(shí)驗(yàn)組16只；2.左側(cè)對(duì)照組16只。
　　1.2手術(shù)制造動(dòng)物模型：
　　所有的動(dòng)物都以4％的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(1mg/kg)后平臥位固定動(dòng)物于手術(shù)臺(tái)，頸部常規(guī)備皮消毒，手術(shù)剪刀與頸部皮膚正中剪開(kāi)長(zhǎng)約5cm，嚴(yán)格按照正中用兩把止血鉗鈍性分離頸部肌肉，暴露出白色氣管，然后沿氣管兩側(cè)肌肉之間的纖維間隔向下分離，頸總動(dòng)脈位于氣管兩側(cè)，腹面由胸骨舌骨肌和胸骨甲狀肌所覆

3、蓋，用止血鉗分離其上方的肌肉組織，可見(jiàn)頸動(dòng)脈鞘，內(nèi)可見(jiàn)一條粉紅色血管及若干條神經(jīng)被包裹在血管神經(jīng)束內(nèi)，用手指觸摸血管時(shí)有搏動(dòng)感，此即為頸總動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈旁即是迷走神經(jīng)、交感神經(jīng)及減壓神經(jīng)，用玻璃分針小心仔細(xì)撕開(kāi)頸動(dòng)脈鞘并分離出一段長(zhǎng)約2cm的頸總動(dòng)脈，然后進(jìn)一步分離出與之伴行的迷走神經(jīng)干，長(zhǎng)約2cm。將大小約1.5cm*1.0cm的醫(yī)用滌綸片置于游離的頸動(dòng)脈和迷走神經(jīng)下方，并將剪碎成1mm左右的5-0的鉻制可吸收腸線充分放置在迷走神經(jīng)周

4、圍。將滌綸片縫合固定在一側(cè)肌肉上使迷走神經(jīng)緊密接觸頸動(dòng)脈造成血管壓迫神經(jīng)，建立神經(jīng)源性高血壓家兔模型。
　　1.3造模對(duì)照組：
　　僅將同側(cè)頸動(dòng)脈鞘分離開(kāi)，暴露出頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)。將大小約1.5cm*1.0cm的醫(yī)用滌綸片置于游離的頸動(dòng)脈和迷走神經(jīng)下方縫合固定在一側(cè)肌肉上使迷走神經(jīng)緊密接觸頸動(dòng)脈造成血管壓迫神經(jīng)即可。
　　1.4觀察指標(biāo)的測(cè)量：
　　1.4.1所有家兔，分別于術(shù)前一周、術(shù)后一、三、六周用美國(guó)Su

5、rgivet動(dòng)物監(jiān)護(hù)儀測(cè)量血壓。每日同一動(dòng)物于同一時(shí)間重復(fù)測(cè)量10次并記錄。
　　1.4.2于術(shù)前一周、術(shù)后三、六周分別采血測(cè)量腎素(PRA)-血管緊張素(AngⅡ)-醛固酮(ALD)系統(tǒng)的指標(biāo)變化。
　　1.4.3所有家兔均于術(shù)后六周抽取血液后三天，活體麻醉狀態(tài)下快速取出手術(shù)側(cè)迷走神經(jīng)，長(zhǎng)度約1cm，4％戊二醛固定后進(jìn)行超薄切片，透射電鏡(日立H2500)下進(jìn)行標(biāo)本觀察。
　　1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析：
　　應(yīng)用S

6、PSS統(tǒng)計(jì)軟件，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料的方差分析以及非參數(shù)檢驗(yàn)等方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P<0.05為有顯著差異。確認(rèn)造模實(shí)驗(yàn)組家兔血壓值升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，造模成功。
　　結(jié)果：
　　1本組實(shí)驗(yàn)家兔共32只，9只于實(shí)驗(yàn)過(guò)程死亡，其中1只(實(shí)驗(yàn)組)死于麻醉意外，2只(實(shí)驗(yàn)組)死于手術(shù)后感染，6只(其中2只為對(duì)照組)死于術(shù)后飼養(yǎng)過(guò)程中。考慮為手術(shù)對(duì)迷走神經(jīng)刺激過(guò)強(qiáng)對(duì)動(dòng)物機(jī)體損傷較大原因?qū)е录彝盟劳觥?br>　　2血壓改變(收

7、縮壓)
　　對(duì)照組術(shù)后一周，三周，六周家兔收縮壓同術(shù)前比較都沒(méi)有顯著性差別(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)前收縮壓比較沒(méi)有顯著性差別(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后一周家兔收縮壓和術(shù)前比較沒(méi)有顯著性差別(P>0.05)(Fig.13)；三周時(shí)有升高趨勢(shì)，但是沒(méi)有顯著性差別(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后六周家兔收縮壓和術(shù)前比較有顯著升高(P<0.05)(Fig.14，Table1)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后一周(Fig.11)，術(shù)后三周收縮壓

8、都沒(méi)有顯著性差別(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后六周收縮壓有顯著差別(p<0.05)。(Fig.12)
　　3血液指標(biāo)
　　左側(cè)實(shí)驗(yàn)組術(shù)后六周家兔血漿血管緊張素(AngⅡ)與術(shù)前比升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)(Fig.15)，醛固酮(ALD)系統(tǒng)水平均比術(shù)前有升高，但沒(méi)有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(Fig.16)，血漿內(nèi)腎素(PRA)與術(shù)前比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(Fig.17)；對(duì)照組手術(shù)前后家兔血漿內(nèi)血管

9、緊張素(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、腎素(PRA)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。(Fig.15，16，17，Table2)
　　4組織學(xué)表現(xiàn)
　　4.1肉眼觀察：
　　實(shí)驗(yàn)組家兔的迷走神經(jīng)呈紅褐色，與周?chē)苷尺B緊密，呈圓柱狀或扁圓柱狀。
　　對(duì)照組家兔迷走神經(jīng)呈銀白色，與周?chē)苷尺B不緊，呈圓柱狀。
　　4.2電鏡下觀察結(jié)果顯示：
　　手術(shù)血管壓迫脫髓鞘組迷走神經(jīng)，板層排列紊亂，水腫。施萬(wàn)細(xì)胞

10、核膜局部缺損，線粒體內(nèi)膜融合消失，胞質(zhì)水腫、(Fig.9，10)；而對(duì)照組正常有髓鞘迷走神經(jīng)顯示：呈類(lèi)圓形或圓形，髓鞘厚度一致，板層結(jié)構(gòu)清晰，施萬(wàn)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整、胞漿均勻，內(nèi)可見(jiàn)結(jié)構(gòu)清晰的線粒體。(Fig.7，8)
　　結(jié)論：
　　1本實(shí)驗(yàn)使用可吸收鉻制腸線對(duì)迷走神經(jīng)進(jìn)行脫髓鞘處理并行血管搏動(dòng)性壓迫，制造類(lèi)似于人類(lèi)血管搏動(dòng)性壓迫脫髓鞘迷走神經(jīng)致神經(jīng)源性高血壓。
　　2手術(shù)只需打開(kāi)動(dòng)物頸動(dòng)脈鞘，操作方法簡(jiǎn)單，容易推廣。<