雞肝臟microRNA-122表達調控機制和功能研究.pdf

1、MicroRNA是一類單鏈小分子非編碼RNA，在基因轉錄后水平通過和靶mRNA的堿基配對導致翻譯抑制或mRNA降解，參與器官的發(fā)育、細胞的分化、增殖、凋亡等多種生物學過程，且和多種疾病密切相關。miR-122是在肝臟中高表達的miRNA，在肝臟的生長發(fā)育、脂類代謝等過程發(fā)揮重要作用，它的異常表達還跟肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展有關。本研究以雞miR-122為研究對象，對其表達調控機制和功能方面進行了研究，結果如下：
　　(1)運用生物信息學

2、分析和5’RACE方法確定了雞miR-122的轉錄起始位點位于pre-miR-122上游的3294(chrZ:757760)位置，用序列刪除技術證明雞miR-122核心啟動子區(qū)位于pre-miR-122上游3.8~3.2 kb區(qū)域。
　　(2)為了研究雞miR-122的表達調控機制，我們預測到在雞miR-122的啟動子區(qū)含有轉錄因子HNF3β的結合位點，將這個位點突變后能明顯降低miR-122的啟動子活性，用EMSA研究發(fā)現HNF

3、3β能夠在體外和雞miR-122的啟動子區(qū)結合，推測HNF3β能結合該位點激活miR-122的轉錄。
　　(3)通過生物信息學預測和雙熒光素酶報告系統(tǒng)證明 VNN1和 BZW2是miR-122的靶基因，靶位點突變實驗證明VNN1和BZW2基因的3’UTR與miR-122種子區(qū)的互補位點為靶位點。
　　(4)將miR-122在LMH細胞中過表達后，發(fā)現靶基因BZW2 mRNA表達水平顯著下降，VNN1 mRNA表達水平沒有顯著

4、變化。利用LNA-antimiR-122抑制雞肝臟原代細胞中的miR-122后，miR-122的靶基因VNN1和BZW2 mRNA表達水平都呈顯著性上升。結果表明靶基因BZW2在mRNA水平上受到miR-122的負性調控，而VNN1在mRNA水平上不受到miR-122的調控。
　　(5)靶基因VNN1在不同組織中的表達特征跟miR-122的表達特征相一致，都是在雞肝臟中表達量最高，其次是肺，在脾、腎、脂肪中微量表達，在其他組織中表