瘦素對(duì)雞肝臟脫碘酶基因表達(dá)與活性的影響.pdf

1、甲狀腺素對(duì)禽類的生長(zhǎng)發(fā)育起著十分重要的作用，而肝臟脫碘酶是調(diào)控循環(huán)甲狀腺激素穩(wěn)態(tài)的主要因子。本實(shí)驗(yàn)室以往的研究結(jié)果顯示蛋內(nèi)注射Leptin能夠程序化地影響出雛后肉雞的生長(zhǎng)和發(fā)育，但是這種處理效應(yīng)是否和血液中的甲狀腺激素水平與肝臟中脫碘酶表達(dá)的改變有關(guān)，還不清楚。因此本研究旨在探討：（1）蛋內(nèi)注射Leptin對(duì)出雛后肉雞早期血清甲狀腺激素水平的影響；（2）蛋內(nèi)注射Leptin對(duì)肝臟脫碘酶基因表達(dá)和活性的影響；（3）Leptin影響脫碘酶表

2、達(dá)與活性的可能機(jī)制。
　　 1蛋清內(nèi)注射瘦素對(duì)肉雞血清甲狀腺激素水平和肝臟脫碘酶表達(dá)及活性的影響
　　 挑選蛋重相近的三黃肉雞種蛋，隨機(jī)分為兩組：對(duì)照組（Control，Con）在蛋清內(nèi)注射100μL溶劑（Phosphate buffered saline，PBS），Leptin處理組注射5.0μg/100μLPBS（Lep）的重組小鼠Leptin，出雛后飼養(yǎng)至21日齡時(shí)采取肝臟和血清樣品。用放免的方法測(cè)定血清總T3水平

3、（Total T3，TT3），總T4水平（Total T4，TT4）和游離T3水平（Free T3，F(xiàn)T3）。實(shí)時(shí)熒光RT-PCR定量檢測(cè)21日齡肝臟使T4脫碘轉(zhuǎn)化為T3的脫碘酶1（D1）和使T3脫碘失活的脫碘酶3（D3）的基因表達(dá)，采用離子交換層析法檢測(cè)D1和D3的活性。結(jié)果表明：Lep組肉雞21日齡血清中FT3和TT3的含量均顯著升高（P<0.05），并且主要表現(xiàn)在雄性（P<0.05），雌性上述各指標(biāo)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。血清中T

4、4水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。D1的基因表達(dá)和活性均在Lep組雄性中顯著上調(diào)，而雌性與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。D3的基因表達(dá)在Lep組雄性中顯著下調(diào)，而在雌性中顯著上調(diào)，D3活性在Lep組雄性中顯著下調(diào)，雌性與對(duì)照組相比無(wú)差異。以上結(jié)果說(shuō)明：蛋內(nèi)注射Leptin能夠顯著提高出雛后肉雞血清T3和游離T3水平，與肝臟脫碘酶D1上調(diào)而D3下調(diào)有關(guān)，這種處理效應(yīng)主要表現(xiàn)在雄性。
　　 2瘦素影響體外培養(yǎng)原代雞胚肝細(xì)胞中脫碘酶基因表達(dá)和活性

5、的機(jī)制研究
　　 很多研究表明leptin主要通過(guò)三條信號(hào)途徑（JAK-STAT途徑，MAPK途徑和PI3K途徑）起作用，然而瘦素到底通過(guò)哪條途徑影響雞胚肝細(xì)胞中脫碘酶的表達(dá)，還未見報(bào)道。為探討Leptin影響脫碘酶表達(dá)的可能機(jī)制，本試驗(yàn)采用分離原代雞胚肝細(xì)胞，血清培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞完全貼壁后，改用無(wú)血清添加胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白和硒元素（ITS）培養(yǎng)液，并研究不同濃度的Leptin（0，1，10，100ng/mL）處理肝細(xì)

6、胞48 h對(duì)脫碘酶表達(dá)的影響。此外，分別采用Leptin三條信號(hào)通路的抑制劑（JAK2抑制劑：AG490、ERK抑制劑：PD98590、PI3K抑制劑：LY294002）分析Leptin影響肝細(xì)胞脫碘酶表達(dá)的可能信號(hào)通路。結(jié)果顯示：Leptin處理能夠顯著上調(diào)D1的基因表達(dá)與活性，同時(shí)下調(diào)D3的基因表達(dá)與活性；Leptin對(duì)D1的基因表達(dá)與活性的誘導(dǎo)作用可以被PI3K抑制劑LY294002逆轉(zhuǎn)；而三條信號(hào)通路抑制劑均不能逆轉(zhuǎn)Leptin