外源性三碘甲腺原氨酸對(duì)金定鴨出雛前后生長(zhǎng)及肝臟中脫碘酶表達(dá)的影響.pdf

1、胚胎期骨骼肌的發(fā)生決定鴨產(chǎn)肉量，比較發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度差異較大兩品種鴨胚胎期生長(zhǎng)速度不同，且生長(zhǎng)速度較快品種鴨蛋清內(nèi)三碘甲腺原氨酸(T3)含量顯著高于后者。假設(shè)蛋清內(nèi)T3含量與鴨生長(zhǎng)速度呈正相關(guān)，增加蛋清內(nèi)T3含量會(huì)促進(jìn)鴨生長(zhǎng)。為驗(yàn)證假說(shuō)，設(shè)計(jì)蛋清內(nèi)注射T3試驗(yàn)，監(jiān)測(cè)鴨出雛前后生長(zhǎng)、血清中甲狀腺激素(thyroid hormones，THs)含量及THs穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)控因子——肝臟中脫碘酶(deiodinases)的表達(dá)情況;設(shè)計(jì)外源性T3干擾

2、鴨胚原代肝細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)，檢測(cè)細(xì)胞中脫碘酶的表達(dá)。探討外源性T3對(duì)鴨出雛前后生長(zhǎng)及肝臟中脫碘酶表達(dá)的影響。
　　1.蛋清內(nèi)注射T3對(duì)鴨出雛前后生長(zhǎng)及血清中THs含量的影響
　　金定鴨種蛋200枚，隨機(jī)分為兩組:對(duì)照組蛋清內(nèi)（Control group，Con）注射100μL不含T3的生理鹽水，試驗(yàn)組蛋清內(nèi)（Treatment group，Tre）注射100μL含250 ng T3的生理鹽水，兩組種蛋在同一條件下同期孵化。監(jiān)測(cè)2

3、7胚齡和7日齡鴨體重和胸肌重的變化，并采集鴨的血液;放射性免疫分析法檢測(cè)血清中T3和T4的含量;分析鴨出雛前后體重、胸肌重與血清T3、T4含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，試驗(yàn)組鴨體重和胸肌重在27胚齡和7日齡均顯著高于對(duì)照組(P=0.035，0.044;0.027，0.037)，試驗(yàn)組血清中T3和T4的含量在7日齡均顯著低于對(duì)照組(P=0.040，0.040);試驗(yàn)組鴨體重與T3含量呈極顯著負(fù)線性相關(guān)(r=-0.821，P=0.000)。<

4、br>　　2.蛋清內(nèi)注射T3對(duì)鴨出雛前后肝臟中脫碘酶表達(dá)的影響
　　試驗(yàn)設(shè)計(jì)與上一章相同，采集鴨27胚齡和7日齡時(shí)的肝臟。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)肝臟中D1和D3的mRNA表達(dá)，ELISA法檢測(cè)肝臟中D1和D3的蛋白含量及酶活性。分析D1和D3的表達(dá)與血清T3、T4含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，試驗(yàn)組肝臟D3的mRNA表達(dá)以及D1、D3的蛋白含量和酶活性在7日齡均顯著低于對(duì)照組(P=0.049;0.017，0.042;

5、0.013，0.039)。試驗(yàn)組血清中T4含量與D3的mRNA表達(dá)呈極顯著正線性相關(guān)(r=0.913，P=0.001)，T3含量與D1和D3蛋白含量及酶活性均呈顯著正線性相關(guān)(r=0.790，P=0.011;r=0.746, P=0.021;r=0.757，P=0.018;r=0.744,P=0.022)。
　　3.外源性T3對(duì)鴨胚原代肝細(xì)胞中脫碘酶表達(dá)的影響
　　分離并培養(yǎng)鴨15胚齡原代肝細(xì)胞，24 h后隨機(jī)分為三組即對(duì)照

6、組(Control group，Con)、低濃度T3干擾組(Low T3 group，LT3)和高濃度T3干擾組(High T3group，HT3)。Con組細(xì)胞液中導(dǎo)入2μL不含T3的生理鹽水;LT3和HT3組細(xì)胞液中分別導(dǎo)入終濃度為5 ng/mL和20 ng/mL的T3，均以2μL生理鹽水為載體。干擾36h后細(xì)胞換液并繼續(xù)培養(yǎng)12h。在干擾后0h和12h時(shí)收集細(xì)胞并用Cell Counting Kit(CCK-8)法檢測(cè)細(xì)胞活性，R

7、T-PCR檢測(cè)細(xì)胞中D1和D3的mRNA表達(dá)，ELISA檢測(cè)細(xì)胞D1和D3的蛋白含量及酶活性。結(jié)果顯示，LT3組細(xì)胞活性及D1的mRNA表達(dá)在干擾后的0h和12h均顯著高于對(duì)照組（P=0.026，0.006;0.000，0.000）。
　　全文結(jié)論:蛋清內(nèi)T3含量的差異與鴨的早期生長(zhǎng)有一定的相關(guān)性，外源性T3(250 ng)促進(jìn)了鴨出雛前后體重和胸肌重的增長(zhǎng)，降低了鴨出雛后血清中T3和T4的含量;鴨出雛前后生長(zhǎng)模式發(fā)生改變，伴隨著