尿毒癥毒素對(duì)HepG2細(xì)胞炎癥因子及脫碘酶表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討不同濃度尿毒癥毒素對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞1型脫碘酶(Iodothyronine deiodinase typeⅠ, D1)、白介素-1β(Interleukin-1 beta, IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)及腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)mRNA表達(dá)的影響,探尋慢性腎功能不全患者非甲狀腺疾病綜合征(Nonthyroidal Illness

2、Syndrome, NTIS)與微炎癥狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　方法:(1)將體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞隨機(jī)分組:①空白對(duì)照組:未加任何刺激物;②低濃度尿毒癥毒素刺激組(終濃度為20mmol/L尿素、100umol/L肌酐、40umol/L尿酸、0.2pg/ml甲狀旁腺激素和1×10-5mol/L精脒的混合液);③中等濃度尿毒癥毒素刺激組(終濃度為50mmol/L尿素、200umol/L肌酐、80umol/L尿酸、2pg/ml甲狀旁腺激

3、素和1×10-4mol/L精脒的混合液);④高濃度尿毒癥毒素刺激組(終濃度為80mmol/L尿素、500umol/L肌酐、200umol/L尿酸、20pg/ml甲狀旁腺激素和1×10-3mol/L精脒的混合液)。以上各組分別刺激12h、24 h。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α、D1的轉(zhuǎn)錄水平。(2)收集本科室已診斷為慢性腎功能不全患者和健康體檢者的血液標(biāo)本,ELISA法檢測(cè)其血清IL-6的蛋白表達(dá)水平,并采集

4、其臨床資料。
　　結(jié)果:(1)①低濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表達(dá)均較空白對(duì)照組升高(12h組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分別為0.016、0.042、0.015;24h組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01),而D1 mRNA的表達(dá)較空白對(duì)照組降低(12h組和24h組P值均小于0.01)。中等濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h

5、后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較空白對(duì)照組升高(12h組和24h組IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01),而D1 mRNA的表達(dá)較空白對(duì)照組降低(12h組和24h組P值均小于0.01)。高濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較空白對(duì)照組升高(12h組和24h組IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01),而D1 mRNA的表達(dá)較

6、空白對(duì)照組降低(12h組和24h組P值均小于0.01)。②中等濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較低濃度尿毒癥毒素組升高(12h組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分別為小于0.01、0.012、小于0.01;24h組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01),而D1 mRNA的表達(dá)較低濃度尿毒癥毒素組降低(12h組P值為0.013;24h組P值小于0.

7、01)。③高濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較低濃度尿毒癥毒素組升高(12h組和24h組IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01),而D1 mRNA的表達(dá)較低濃度尿毒癥毒素組降低(12h組和24h組P值均小于0.01)。④高濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較中等濃度尿毒癥毒素組升高(12h組和2

8、4h組IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01;24h組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分別為小于0.01、0.035、0.013),而D1 mRNA的表達(dá)較中等濃度尿毒癥毒素組降低(12h組P值為0.011;24h組P值為0.036)。⑤低濃度、中等濃度、高濃度尿毒癥毒素刺激HepG2細(xì)胞24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)均較刺激12h升高(低濃度組和中等濃度組IL-1β、IL-6、TNF-α

9、的P值均小于0.01;高濃度組:IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分別為0.011、小于0.01、0.042),而D1 mRNA的表達(dá)較刺激12h降低(低濃度組P值為0.038;中等濃度組P值為0.017;高濃度組P值為0.038)。(2)根據(jù)ELISA法檢測(cè)人血清IL-6表達(dá)水平與估算的腎小球?yàn)V過(guò)率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)值、游離三碘甲狀腺原氨酸(Free triio

10、dothyronine, FT3)等臨床資料的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),eGFR值與血清FT3濃度呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.465,P<0.01),eGFR值與血清IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.764,P<0.01),血清IL-6與FT3濃度呈負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.643,P<0.01)。
　　結(jié)論:在一定濃度、時(shí)間范圍內(nèi),隨著尿毒癥毒素濃度的增高、刺激時(shí)間的延長(zhǎng),HepG2細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)增