慢性碘過(guò)量對(duì)Wistar大鼠垂體TSHβ表達(dá)和2型脫碘酶活性的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：碘是人體所必需的一種微量元素,是甲狀腺激素合成的重要組成物質(zhì)。碘攝入量與甲狀腺疾病之間的關(guān)系近年來(lái)一直受到內(nèi)分泌學(xué)界的關(guān)注。碘缺乏病(iodine deficiency disorders,IDD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病。國(guó)際權(quán)威組織推薦普遍食鹽加碘(USI)來(lái)消除IDD,但是隨著全球糾正碘缺乏的快速進(jìn)展,碘過(guò)量出現(xiàn)。2001年WHO等權(quán)威組織明確規(guī)定人群尿碘中位數(shù)(MUI)100μg/L-199μg/L為碘充足,200-3

2、00μg/L為碘超足量,MUI大于300μg/L為碘過(guò)量。
　　 本課題組在3個(gè)不同碘攝入量農(nóng)村社區(qū)(MUI分別為103μg/L,374μg/L和614μg/L)進(jìn)行的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,隨著碘攝入量的增加臨床甲減和亞臨床甲減的發(fā)病率顯著增加。該結(jié)果提示了碘過(guò)量有導(dǎo)致甲狀腺功能減退的危險(xiǎn)。此調(diào)查中共發(fā)現(xiàn)121例亞臨床甲減患者,僅有30％為甲狀腺自身抗體陽(yáng)性,提示非自身免疫因素可能是碘致甲減的重要機(jī)制。
　　 甲狀腺激素

3、對(duì)TSH合成及分泌的負(fù)反饋調(diào)節(jié)是通過(guò)T3介導(dǎo)的。垂體組織T3的主要來(lái)源是T4在局部被垂體2型脫碘酶(D2)脫碘轉(zhuǎn)變成T3,其后T3與細(xì)胞核內(nèi)的甲狀腺激素受體β2亞型(TRβ2)結(jié)合,繼而調(diào)節(jié)TSH的合成和分泌。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體8((Monocarboxylatetransporter8(MCT8))在T4進(jìn)入垂體D2表達(dá)細(xì)胞過(guò)程中起重要作用。所以我們提出假設(shè):慢性碘過(guò)量可能通過(guò)影響D2、MCT8和/或TRβ2表達(dá)導(dǎo)致TH合成及分泌

4、的變化。
　　 本研究選用無(wú)自身免疫傾向的Wistar大鼠作為研究對(duì)象,模擬前期流行病學(xué)調(diào)查中人群的碘營(yíng)養(yǎng)狀態(tài),觀察慢性碘過(guò)量(3倍-50倍生理需要量)對(duì)其垂體TSH合成和分泌影響,進(jìn)而檢測(cè)慢性碘過(guò)量對(duì)Wistar大鼠垂體D2活性,垂體D2、MCT8和,TRβ2表達(dá)水平的影響,以探討慢性碘過(guò)量Wistar大鼠垂體TSHβ表達(dá)的影響及其非自身免疫機(jī)制。
　　 方法：選擇4周齡Wistar大鼠240只,雌雄各半,隨機(jī)分成5組

5、,分別為正常對(duì)照組、3倍高碘組、6倍高碘組、10倍高碘組和50倍高碘組分別飼以普通飼料加普通無(wú)菌水、含碘277μg/L,692μg/L,1245μg/L及6788μg/L的碘化鈉溶液。分別在給處理因素后4、8、12和24周時(shí)處死動(dòng)物。留取各組Wistar大鼠血清,免疫化學(xué)發(fā)光分析法測(cè)定各組大鼠血清促甲狀腺激素(TSH)、總?cè)饧谞钕侔彼?TT3)和總四碘甲狀腺原氨酸(TT4)水平；留取各組Wistar大鼠垂體,一部分樣本用于免疫組織化學(xué)

6、染色檢測(cè)TSHβ亞基(TSHβ)表達(dá)水平；一部分樣本用于測(cè)D2活性及Western Blot方法檢測(cè)D2、MCT8和TRβ2蛋白表達(dá)水平；一部分樣本提取Wistar大鼠垂體細(xì)胞總RNA,實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)TSHβ、D2、MCT8 mRNA表達(dá)水平。
　　 應(yīng)用SPSS16.0軟件處理和分析數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以-x±SE表示,兩個(gè)以上均數(shù)比較用單因素方差分析,兩兩比較用Newman-Keuls檢驗(yàn)(方差齊)或者Ounnett's

7、Multiple Com-parison檢驗(yàn)(方差不齊)。以P＜0.05為顯著差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、Wistar大鼠體重以及垂體相對(duì)重量各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠血清TT3、TT4各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠血清TSH值增加,其中8周50倍高碘組血清TSH均值比較正常對(duì)照組增高2.09倍,12周10倍、

8、50倍高碘組血清TSH均值比較正常對(duì)照組分別增高1.47和1.49倍,24周10倍、50倍高碘組比較正常對(duì)照組分別增高2.13和2.31倍(p＜0.05)。
　　 4、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體TSHβ蛋白表達(dá)量增加,其中8周50倍高碘組,12周10倍、50倍高碘組,24周10倍、50倍高碘組顯著升高(p＜0.05)。
　　 5、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體TSHβmRNA表達(dá)量增加,其中8周50倍高碘

9、組垂體TSHβ mRNA表達(dá)水平比較正常對(duì)照組增高1.58倍(p＜0.05),12周10倍、50倍垂體TSHβ mRNA表達(dá)水平比較正常對(duì)照組分別增高1.98和1.77倍,24周10倍、50倍高碘組比較正常對(duì)照組分別增高2.33和3.16倍(p＜0.001)。
　　 6、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體D2活性下降,其中8周50倍高碘組大鼠垂體D2活性比較正常對(duì)照組下降25％,(p＜0.05),12周10倍、50倍高碘組大鼠

10、垂體D2活性比較正常對(duì)照組下降大于50％,24周10倍、50倍高碘組大鼠垂體D2活性比較正常對(duì)照組下降大于70％(p＜0.001)。8周50倍高碘組(p＜0.05),12周10倍、50倍高碘組,24周10倍、50倍高碘(p＜0.001)組顯著降低。
　　 7、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體D2蛋白表達(dá)量和mRNA表達(dá)水平各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 8、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體MCT8蛋白表達(dá)量

11、和mRNA表達(dá)水平各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 9、隨碘攝入量增加,Wistar大鼠垂體TRβ2蛋白表達(dá)水平各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、慢性碘過(guò)量能使Wistar大鼠垂體TSH合成和分泌均增加；
　　 2、慢性碘過(guò)量能使Wistar大鼠TSHβ mRNA表達(dá)量明顯增加提示,碘對(duì)TSH存在翻譯前水平的調(diào)控；
　　 3、慢性碘過(guò)量對(duì)Wistar大鼠垂體MCT8蛋白表