TFEB對成骨細(xì)胞早期分化功能的影響以及血尿酸與男性T2DM患者骨密度的關(guān)系.pdf

1、本文分析了TFEB對成骨細(xì)胞早期分化功能的影響以及血尿酸與男性T2DM患者骨密度的關(guān)系。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：TFEB對成骨細(xì)胞早期分化功能的影響。
　　目的：骨質(zhì)疏松癥是影響老年人生活質(zhì)量的主要因素之一，成骨細(xì)胞功能異常在骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性的作用。研究表明自噬對成骨細(xì)胞礦化的功能起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用，TFEB轉(zhuǎn)錄因子是重要的自噬調(diào)節(jié)因子。因此本研究旨在探究：在成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞

2、分化過程中自噬水平以及TFEB的變化；轉(zhuǎn)錄因子TFEB對成骨細(xì)胞分化功能是否有影響，并進(jìn)一步闡明轉(zhuǎn)錄因子TFEB和細(xì)胞自噬與骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為臨床預(yù)防骨質(zhì)疏松癥和開發(fā)新的抗骨質(zhì)疏松癥藥物提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：⑴選用成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1細(xì)胞，并對其進(jìn)行成骨誘導(dǎo)，分別檢測誘導(dǎo)不同時間點成骨分化標(biāo)志基因，自噬相關(guān)基因和 TFEB基因的表達(dá)水平。⑵采用Western blot檢測細(xì)胞的自噬標(biāo)志蛋白LC3的水平，

3、比較成骨誘導(dǎo)不同時間點時自噬標(biāo)志蛋白表達(dá)量的變化。⑶采用透射電鏡觀察自噬體的結(jié)構(gòu)。⑷利用LC3雙熒光慢病毒自噬流檢測系統(tǒng)在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察自噬體的聚集。⑸收集成骨誘導(dǎo)的細(xì)胞RNA，做自噬相關(guān)基因的PCR芯片分析。⑹利用si-TFEB慢病毒感染MC3T3-E1細(xì)胞，對TFEB敲除的細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，用Realtime-PCR和Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)成骨分化標(biāo)志基因和自噬水平的變化。
　　結(jié)果：①在成骨細(xì)

4、胞系 MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化過程中，自噬相關(guān)基因和蛋白表達(dá)升高，同時，在透射電鏡下觀察到囊狀雙層膜的自噬體，激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察到標(biāo)記有GFP/RFP的自噬體的聚集，以及自噬相關(guān)基因的PCR芯片聚類圖顯示多種自噬相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào)，這些現(xiàn)象表明細(xì)胞內(nèi)的自噬水平是升高的。②TFEB敲除的細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)分化后，其成骨分化標(biāo)志基因明顯低于對照組，細(xì)胞內(nèi)的自噬水平也明顯低于對照組。
　　結(jié)論：成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞在成

5、骨分化早期自噬被激活，TFEB的表達(dá)上調(diào)，當(dāng) TFEB敲除后，細(xì)胞的成骨分化能力和自噬水平均下調(diào)，這表明 TFEB對成骨細(xì)胞的早期分化具有一定調(diào)節(jié)作用，而這種作用有可能是通過自噬途徑實現(xiàn)的。
　　第二部分：血尿酸水平與男性2型糖尿病患者骨密度的關(guān)系。
　　目的：探討男性2型糖尿病（type2 diabetes mellitus，T2DM）患者的血尿酸（UA）水平與骨密度之間的關(guān)系。
　　方法：本研究為回顧性分析，共納入

6、男性2型糖尿病患者621例，采用雙能X線骨密度儀（DXA）檢測腰椎（L2-4）、股骨頸（FN）和全髖（TH）的骨密度（BMD），同時檢測血清尿酸（UA）水平及血鈣（Ca），維生素D3，甲狀旁腺激素（PTH），血肌酐（Cr）水平。
　　結(jié)果：數(shù)據(jù)分析顯示，在校正多種協(xié)變量之后，血尿酸水平與腰椎（L2-4）、股骨頸（FN）和全髖（TH）的骨密度（BMD）之間均存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。血尿酸水平與體重、BMI、血鈣、血肌酐