共刺激分子B7-H3在急性胰腺炎中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分抗B7-H3單克隆抗體對(duì)小鼠急性胰腺炎模型的影響及機(jī)制研究
　　目的：探究抗 B7-H3單克隆抗體（mAb）對(duì)小鼠急性胰腺炎模型的影響及機(jī)制研究。
　　方法：將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、AP組、IgG治療組、抗B7-H3 mAb治療組。采用腹腔注射L-精氨酸的方法制備小鼠急性胰腺炎（AP）模型，IgG治療組于造模前2h注射IgG，抗B7-H3 mAb治療組于造模前2h注射抗B7-H3 mAb，于造模后2d、3d、4d，收集

2、各組小鼠血液、胰腺及肺組織標(biāo)本。采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）法檢測對(duì)照組及AP組小鼠胰腺組織B7-H3蛋白表達(dá)。應(yīng)用全自動(dòng)生化免疫分析儀檢測各組小鼠血清淀粉酶及脂肪酶活性，HE染色評(píng)估各組小鼠胰腺及肺組織病理變化，采用Western blot法檢測各組小鼠胰腺組織磷酸化NF-κB蛋白表達(dá)變化，ELISA檢測各組小鼠血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）水平。
　　

3、結(jié)果：B7-H3蛋白在AP小鼠胰腺組織中存在高表達(dá)，AP組血清淀粉酶及脂肪酶水平明顯高于對(duì)照組，抗B7-H3 mAb處理后明顯降低，AP組胰腺組織出現(xiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤及胰腺組織壞死，抗B7-H3 mAb治療組炎性損傷明顯減弱，AP組肺組織出現(xiàn)明顯肺泡壁增厚及炎癥細(xì)胞浸潤，抗B7-H3 mAb治療組肺泡壁增厚程度減輕，AP組TNF-α、IL-6、IL-1β水平隨時(shí)間延長而升高，而抗B7-H3 mAb治療組促炎因子水平相對(duì)降低，抗B7-H3

4、 mAb治療組磷酸化NF-κB蛋白水平降低。
　　結(jié)論：B7-H3在AP模型中存在高表達(dá)，抗B7-H3 mAb可以減弱炎癥反應(yīng),緩解胰腺及肺組織的損傷。
　　第二部分抗B7-H3單克隆抗體對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模型的影響及機(jī)制研究
　　目的：探究抗 B7-H3單克隆抗體（mAb）對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模型的影響及機(jī)制研究。
　　方法：體外分離并培養(yǎng)小鼠胰腺腺泡細(xì)胞，分為對(duì)照組、精氨酸組、I

5、gG治療組、抗B7-H3 mAb治療組，精氨酸組加入5mg/mL的L-精氨酸；IgG治療組加L-精氨酸前加入IgG；抗B7-H3 mAb治療組加L-精氨酸前加入抗B7-H3 mAb。ELISA法檢測6h、12h、24h上清液中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、IL-1β水平。分離并培養(yǎng)腹腔巨噬細(xì)胞，應(yīng)用CD11b抗體對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)行鑒定。將巨噬細(xì)胞分為對(duì)照組、LPS組、精氨酸組、上清液組。LPS組作為陽性對(duì)照，上

6、清液組加入腺泡細(xì)胞精氨酸組上清液。ELISA法檢測6h、12h、24h上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。將兩種細(xì)胞共培養(yǎng)，分為對(duì)照組、AP組、IgG治療組、抗B7-H3 mAb治療組。精氨酸組加入5mg/mL的L-精氨酸；IgG治療組加L-精氨酸前加入IgG；抗B7-H3 mAb治療組加L-精氨酸前加入抗B7-H3 mAb。ELISA法檢測上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平，Western blot法檢測腺泡細(xì)胞磷

7、酸化NF-κB蛋白表達(dá)變化，CCK-8檢測腺泡細(xì)胞生存率。
　　結(jié)果：成功分離并培養(yǎng)小鼠胰腺腺泡細(xì)胞，在腺泡細(xì)胞單培模型中精氨酸組檢測到低水平炎癥因子表達(dá)，抗B7-H3 mAb治療組炎癥因子水平與IgG治療組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。成功分離并培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，在巨噬細(xì)胞單培模型中，精氨酸組未見炎癥因子表達(dá)，而上清液組表達(dá)明顯升高。在共培養(yǎng)模型中抗B7-H3 mAb治療組TNF-α、IL-6、IL-1β水平明顯降低，抗B7-H3 mAb治

8、療組巨噬細(xì)胞中磷酸化NF-κB蛋白水平降低，腺泡細(xì)胞生存率升高。
　　結(jié)論：抗B7-H3 mAb可能通過NF-κB信號(hào)通路減少巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)水平，進(jìn)而緩解胰腺腺泡細(xì)胞損傷。
　　第三部分急性胰腺炎患者外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平及其臨床意義
　　目的：探究急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)患者血清中可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平變化及其

9、對(duì)病情進(jìn)展和嚴(yán)重程度的評(píng)估價(jià)值。
　　方法：以20例健康人血液標(biāo)本為對(duì)照組，收集AP患者發(fā)病1天、3天、7天的血液標(biāo)本共66例，包括輕癥AP（MAP）24例，中度重癥AP（MSAP）24例，重癥AP（SAP）18例；使用ELISA試劑盒檢測血漿中sB7-H1、sB7-H2和sB7-H3水平，評(píng)價(jià)其與病情進(jìn)展及嚴(yán)重程度的相關(guān)性。
　　結(jié)果：MAP、MSAP、SAP3個(gè)亞組血清sB7-H1水平明顯高于正常對(duì)照組。SAP亞組sB7

10、-H1水平隨病程進(jìn)展逐漸增加，發(fā)病第7天最高，與第3天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第7天時(shí)SAP亞組顯著高于MSAP亞組。MAP、MSAP、SAP3個(gè)亞組患者血清sB7-H2水平明顯低于正常對(duì)照組，且3個(gè)亞組第1天sB7-H2均為最高值，此后呈下降趨勢。MAP亞組第1天sB7-H2與第3天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在病程第7天，MAP亞組血清sB7-H2明顯高于MSAP。MAP、MSAP、SAP3個(gè)亞組患者血清sB7-H3水平明顯高于正常對(duì)照

11、組。SAP亞組患者sB7-H3呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢，發(fā)病第3天與第7天比較時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。發(fā)病第1天時(shí)，SAP亞組sB7-H3水平顯著高于MSAP亞組。第3天和第7天同一時(shí)點(diǎn)不同亞組比較，MSAP亞組顯著高于MAP，SAP亞組顯著高于MSAP亞組。通過ROC曲線檢測發(fā)現(xiàn)sB7-H3診斷SAP的準(zhǔn)確性隨病程延長而逐漸升高，具有較好的診斷價(jià)值。
　　結(jié)論：動(dòng)態(tài)分析AP外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平具