協(xié)同刺激分子B7-H3在肺癌轉(zhuǎn)移中作用的初步研究.pdf

1、背景：
　　 肺癌是全世界發(fā)病率、病死率最高的癌癥之一，研究表明腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是是肺癌的惡性標(biāo)志和生物學(xué)特征，也是導(dǎo)致患者治療失敗和死亡的主要原因，深入研究肺癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，有助于探討肺癌病因?qū)W機(jī)制，為肺癌的預(yù)后預(yù)警、分子分型和個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。已有研究表明，B7-H3分子與腫瘤（肺癌）的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但確切的機(jī)制尚待探討。
　　 目的：
　　 探索B7-H3途徑在肺癌轉(zhuǎn)移中的作用，為研究B7-H

2、3在腫瘤轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 (1)運(yùn)用靶向B7-H3mRNA的shRNA（小發(fā)夾RNA）轉(zhuǎn)染人肺癌H1299細(xì)胞株，并通過熒光顯微鏡觀察、實(shí)時(shí)定量PCR(real-timePCR)、反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和流式檢測(flowcytometry，F(xiàn)CM)的方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。
　　 (2)利用B7-H3ˉH1299(H1299-B7-H3-siRNA)及B7-H3+H1299（H12

3、99-sn-siRNA），以及cck8、劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)以及凋亡檢測分析B7-H3對肺癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲以及凋亡的影響。同時(shí)，利用B7-H3ˉH1299及B7-H3+H1299細(xì)胞株，自裸鼠皮下接種構(gòu)建移植瘤模型，體內(nèi)分析B7-H3在肺癌進(jìn)展中的可能作用。
　　 結(jié)果：
　　 (1)獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染B7-H3konckdown的H1299工程細(xì)胞;與對照相比，H1299-B7-H3-siRNA細(xì)胞的B7-H3m

4、RNA和B7-H3膜分子的表達(dá)下降至極低水平，甚至檢測不到;(2)與B7-H3+H1299相比，B7-H3ˉH1299的增殖、遷移和侵襲能力顯著下降，而細(xì)胞凋亡增加;(3)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B7-H3ˉH1299荷瘤組小鼠腫瘤生長速度顯著低于B7-H3+H1299荷瘤組小鼠。
　　 結(jié)論：
　　 成功獲得B7-H3基因表達(dá)抑制的人肺癌H1299細(xì)胞株B7-H3ˉH1299;B7-H3可促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并可以