B7-H3在宮頸癌發(fā)展中作用的研究.pdf

1、研究背景
　　宮頸癌是全球范圍內發(fā)病率較高的婦科惡性腫瘤之一，嚴重威脅女性身心健康。據(jù)報道，80％的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國家，而高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素。然而，并非所有高危型HPV感染者都發(fā)展為宮頸癌，只有少數(shù)持續(xù)感染者發(fā)展為宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)，進而發(fā)展為宮頸癌。人免疫缺陷病毒(H

2、uman Immunodeficiency Virus，HIV)感染者或長期應用免疫抑制劑的女性發(fā)生CIN或宮頸癌的概率顯著增加。這提示宮頸癌的發(fā)生不僅與HPV持續(xù)感染有關，還與機體的免疫因素有關。
　　B7家族屬于免疫共刺激分子，可提供T細胞免疫應答的相關刺激信號，也可提供限制和減弱T細胞免疫反應的相關抑制信號，在腫瘤疾病、器官移植和自身免疫病中發(fā)揮重要作用。B7家族已知成員包括B7-1(CD80)，B7-2(CD86)，B7-

3、H1(PD-L1), B7-H2(ICOSL), B7-DC(PD-L2), B7-H3(CD276), B7-H4(B7X)。B7-H3是于2001年被克隆的B7家族成員，目前發(fā)現(xiàn)其有兩種存在形式:2Ig-B7-H3和4Ig-B7-H3。2Ig-B7-H3表達于鼠與人的細胞中，其有細胞外的IgV-IgC結構;4Ig-B7-H3僅表達于人細胞中，由串聯(lián)重復的IgV-IgC-IgV-IgC結構組成。B7-H3廣泛表達于各種器官及細胞中，例

4、如肺，乳腺，肝臟，胎盤，前列腺以及樹突細胞等。研究顯示，B7-H3異常高表達于多種癌細胞或組織中，包括前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、子宮內膜癌、肝癌、結腸癌、骨肉瘤以及血液系統(tǒng)惡性疾病。B7-H3與B7-H1(PD-L1)有相似的分子結構，現(xiàn)已證實腫瘤細胞表達的B7-H1(PD-L1)與T細胞表面的PD-1結合，可以下調T細胞功能，從而促進腫瘤細胞的免疫逃逸，目前針對PD-1/PD-L1(B7-H1)的腫瘤免疫治療藥物已應用于黑色素瘤等的臨

5、床治療。但是，B7-H3在腫瘤免疫方面的功能尚未明確，有文獻報道，B7-H3可下調T輔助1型介導的免疫反應，抑制CD4+T細胞活化，并抑制細胞因子的產(chǎn)生，因而可能發(fā)揮促進癌細胞免疫逃逸的作用。
　　除了可能在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮作用外，B7-H3還可能影響腫瘤的增殖、侵襲和轉移等生物學特征，并與部分腫瘤的預后不良相關。臨床腫瘤研究顯示，B7-H3分子在肺癌、大腸癌、胰腺癌等癌組織中存在高表達，其高表達與腫瘤的擴散或預后較差具有相關性

6、。細胞學水平的研究顯示，B7-H3在胰腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等腫瘤細胞系中的高表達可促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。B7-H3影響腫瘤細胞生物學特征的原因尚不明確。
　　目前，B7-H3分子在宮頸癌中的表達及其作用尚缺乏研究。本研究擬探討B(tài)7-H3在宮頸癌中的表達情況及其與宮頸癌患者病情和預后的關系，并探討B(tài)7-H3在宮頸癌細胞增殖、侵襲及遷移中的作用。
　　研究方法
　　1.臨床病理研究:納入宮頸癌患者和正常對照者，通過

7、免疫組織化學方法檢測B7-H3分子在宮頸癌患者組織標本和正常宮頸組織標本中的表達情況并進行對比，分析其表達水平與患者病理改變、臨床分期和疾病預后的關系;
　　2.B7-H3在血液中表達情況的研究:運用ELISA檢測B7-H3在宮頸癌患者血液標本和正常對照組患者血液標本中的表達情況，并進行對比;
　　3.細胞學試驗:
　　(1)構建細胞系:構建質粒，轉染宮頸癌細胞系，上調或下調Caski、Siha和Hela宮頸癌細胞系中

8、B7-H3分子表達;運用Western Blot驗證細胞系構建是否成功;
　　(2)探討B(tài)7-H3表達對宮頸癌細胞增殖和侵襲能力的影響:通過MTT技術檢測細胞增殖情況;通過Transwell體系檢測細胞侵襲及遷移情況。
　　研究結果:
　　1.B7-H3在宮頸癌組織中的表達顯著高于正常宮頸組織(p＜0.05)，其表達強度與TNM分期相關(r=0.509，p＜0.001);
　　2.B7-H3表達強陽性的患者5年生

9、存率顯著低于B7-H3表達弱陽性或陰性的患者，Cox分析顯示B7-H3高表達是宮頸癌患者死亡的危險因素(HR=4.463，p=0.035);
　　3.B7-H3在宮頸癌患者血液中的表達顯著高于對照組血液中的表達。
　　4.Western Blot結果顯示:B7-H3表達上調及下調宮頸癌細胞系構建成功。
　　5.MTT結果顯示:B7-H3表達上調宮頸癌細胞增殖能力高于正常對照組及表達下調組(p＜0.05); B7-H3表

10、達下調宮頸癌細胞增殖能力低于正常對照組及表達上調組(p＜0.05)。
　　6.Transwell結果顯示: B7-H3表達上調宮頸癌細胞遷移及侵襲能力高于正常對照組(p＜0.05); B7-H3表達下調宮頸癌細胞遷移及侵襲能力低于正常對照組(p＜0.05)。
　　研究結論:
　　1.B7-H3在宮頸癌組織及血液中表達升高，其在宮頸癌組織的表達與患者臨床分期和預后相關;
　　2.B7-H3能夠增強宮頸癌細胞的增殖及