B7-H3在前列腺癌骨轉移中作用的初步研究.pdf

1、目的
　　 前列腺癌(prostatecancer，PCa)是男性最常見的惡性腫瘤之一，遠處轉移是前列腺癌患者死亡的最主要原因，前列腺癌容易發(fā)生遠處轉移的確切機制目前尚不清楚。大量的研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌中B7-H3的表達與腫瘤轉移有密切的關系。B7-H3是由Chapoval等人發(fā)現(xiàn)的B7協(xié)同共刺激分子(costimulatorymolecule)家族成員之一。后來，有研究發(fā)現(xiàn)B7-H3可以介導細胞與細胞之間以及細胞與細胞外基質蛋白之

2、間的粘附，B7-H3粘附功能的發(fā)現(xiàn)為解釋該分子在腫瘤侵襲、轉移中的作用提供了新的線索。本研究旨在初步探索B7-H3在前列腺癌骨轉移中的作用，為研究B7-H3在腫瘤轉移中的機制奠定基礎。
　　 方法
　　 實驗共分為三部分:
　　 (1)利用B7-H3過表達載體轉染前列腺癌LNCap細胞，得到穩(wěn)定過表達B7-H3的前列腺癌細胞B7-H3/LNCap，并通過實時定量PCR(real-timePCR)、逆轉錄PCR(r

3、eversetranscriptionPCR，RT-PCR)及流式細胞技術(flowcytometry，F(xiàn)CM)對該轉染細胞進行鑒定。
　　 (2)前列腺癌轉染前、后體外生物學功能的檢測，包括:基質-細胞粘附實驗檢測細胞粘附能力;劃痕實驗檢測細胞水平遷移能力;Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲力;凋亡實驗檢測細胞對不良環(huán)境的抵抗力;酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)檢

4、測細胞上清中基質金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，MMP-9)的分泌情況。
　　 (3)對部分前列腺癌患者的組織標本進行了B7-H3的免疫組織化學(Immunohistochemistry，IHC);并進行了轉染前、后的動物模型實驗。
　　 結果
　　 (1)轉染后的前列腺癌細胞株B7-H3/LNCap通過real-timePCR、RT-PCR及FCM的鑒定，從mRNA和蛋白質水平上

5、均發(fā)現(xiàn)B7-H3的表達量顯著高于未轉染組LNCap。
　　 (2)通過比較轉染前、后兩組細胞的相關實驗結果顯示，B7-H3/LNCap組細胞的粘附能力、遷移能力、侵襲能力和抗凋亡的能力顯著高于未轉染組LNCap，過表達組細胞上清中MMP-9的含量也顯著高于未轉染組。
　　 (3)臨床組織標本的免疫組化結果顯示，前列腺癌組織中B7-H3的表達顯著高于正常組。在動物模型中，B7-H3/LNCap組的腫瘤明顯大于LNCap組。