GPX3基因甲基化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制研究.pdf

1、【目的】
　　應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR、免疫印跡、免疫組化的方法檢測(cè)4種宮頸癌細(xì)胞系以及135例臨床標(biāo)本中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達(dá)狀況。通過(guò)甲基化PCR(MSP)檢測(cè)各宮頸細(xì)胞和宮頸組織中GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的狀態(tài),在體外試驗(yàn)中通過(guò)5aza-dC誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞去甲基化后檢測(cè)GPX3基因表達(dá)及其生物學(xué)行為的改變來(lái)探討GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展可能的作用。
　　【方法】
　　1.收集華中科技大學(xué)

2、同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科2004-2008年期間住院手術(shù)的臨床標(biāo)本135例,其中正常宮頸組織63例,宮頸癌組織72例,分別應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR及免疫組化的方法來(lái)檢測(cè)正常宮頸組織和宮頸癌組織中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。
　　2.對(duì)以下4種來(lái)源于宮頸癌細(xì)胞系:Siha、Hela、C33a、Caski,分別采用實(shí)時(shí)定量PCR及免疫印跡法來(lái)檢測(cè)GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。
　　3.提取各宮頸癌細(xì)胞系及

3、宮頸組織基因組DNA,通過(guò)亞硫酸氫鹽處理后MSP鑒定各宮頸細(xì)胞系、正常宮頸組織及宮頸癌組織中GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的狀態(tài)。
　　4.應(yīng)用5aza-dC誘導(dǎo)各宮頸細(xì)胞系Siha、Hela、C33a、Caski去甲基化后檢測(cè)GPX3基因表達(dá)及其生物學(xué)行為。
　　【結(jié)果】
　　1.在mRNA水平,GPX3在宮頸癌組織中的表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常宮頸組織;在蛋白水平,GPX3主要表達(dá)于正常宮頸上皮細(xì)胞以及腺體內(nèi),在宮頸癌組織中主要

4、表達(dá)于癌旁組織,而在癌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)是下降的。在各宮頸癌細(xì)胞內(nèi),GPX3的無(wú)論在mRNA還是蛋白水平都是低表達(dá)的。
　　2.GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與其蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān),GPX3的表達(dá)水平隨著其甲基化程度的加重而降低。
　　3.通過(guò)5aza-dC誘導(dǎo)各宮頸細(xì)胞去甲基化后GPX3的表達(dá)被上調(diào),細(xì)胞的增殖,侵襲運(yùn)動(dòng)能力下降,而凋亡率升高。
　　【結(jié)論】
　　GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展