GPX3基因甲基化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制研究.pdf

1、【目的】
　　應用實時定量PCR、免疫印跡、免疫組化的方法檢測4種宮頸癌細胞系以及135例臨床標本中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達狀況。通過甲基化PCR(MSP)檢測各宮頸細胞和宮頸組織中GPX3基因啟動子區(qū)甲基化的狀態(tài),在體外試驗中通過5aza-dC誘導宮頸癌細胞去甲基化后檢測GPX3基因表達及其生物學行為的改變來探討GPX3基因啟動子區(qū)甲基化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展可能的作用。
　　【方法】
　　1.收集華中科技大學

2、同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院婦產(chǎn)科2004-2008年期間住院手術的臨床標本135例,其中正常宮頸組織63例,宮頸癌組織72例,分別應用實時定量PCR及免疫組化的方法來檢測正常宮頸組織和宮頸癌組織中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達情況。
　　2.對以下4種來源于宮頸癌細胞系:Siha、Hela、C33a、Caski,分別采用實時定量PCR及免疫印跡法來檢測GPX3基因mRNA及蛋白水平的表達情況。
　　3.提取各宮頸癌細胞系及

3、宮頸組織基因組DNA,通過亞硫酸氫鹽處理后MSP鑒定各宮頸細胞系、正常宮頸組織及宮頸癌組織中GPX3基因啟動子區(qū)甲基化的狀態(tài)。
　　4.應用5aza-dC誘導各宮頸細胞系Siha、Hela、C33a、Caski去甲基化后檢測GPX3基因表達及其生物學行為。
　　【結果】
　　1.在mRNA水平,GPX3在宮頸癌組織中的表達遠遠低于正常宮頸組織;在蛋白水平,GPX3主要表達于正常宮頸上皮細胞以及腺體內(nèi),在宮頸癌組織中主要

4、表達于癌旁組織,而在癌細胞內(nèi)表達是下降的。在各宮頸癌細胞內(nèi),GPX3的無論在mRNA還是蛋白水平都是低表達的。
　　2.GPX3基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與其蛋白表達呈負相關,GPX3的表達水平隨著其甲基化程度的加重而降低。
　　3.通過5aza-dC誘導各宮頸細胞去甲基化后GPX3的表達被上調(diào),細胞的增殖,侵襲運動能力下降,而凋亡率升高。
　　【結論】
　　GPX3基因啟動子區(qū)甲基化導致其表達下調(diào)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展