CXCR7在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：CXCR7屬于趨化因子家族的成員，在腫瘤生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。本研究主要闡述CXCR7與膀胱癌的相關(guān)性，探索CXCR7對(duì)膀胱癌細(xì)胞的生物行為學(xué)影響。
　　 方法：⑴用Realtime PCR及免疫組化方法檢測(cè)人膀胱癌組織及正常膀胱組織中CXCR7 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。⑵用RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)2種人膀胱癌細(xì)胞株J82及T24中CXCR7 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。⑶通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增CXCR7基因，

2、酶切Lenti-easy-HA載體與CXCR7片段，經(jīng)T4連接酶連接，構(gòu)建Lenti-CXCR7-HA重組質(zhì)粒。將慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，產(chǎn)生慢病毒病毒液，感染人膀胱癌細(xì)胞株T24，經(jīng)G418篩選，獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)CXCR7的T24細(xì)胞。通過(guò)RT-PCR與流式細(xì)胞術(shù)分別鑒定CXCR7 mRNA及蛋白表達(dá)水平。⑷通過(guò)過(guò)表達(dá)人膀胱癌細(xì)胞T24中的CXCR7基因，研究其對(duì)膀胱癌增殖及凋亡能力的影響。
　　 結(jié)果：①CXCR7 mRN

3、A在膀胱癌組織中的表達(dá)(4.93±0.96)明顯高于正常組織(1.18±0.15)(P=0.004)。在膀胱癌組織中CXCR7 mRNA的表達(dá)量還與分期以及腫瘤是否浸潤(rùn)肌層相關(guān)。在pTa-pT1期CXCR7 mRNA的表達(dá)量為（2.04±0.33），而pT2-pT4期表達(dá)量為（7.05±1.52）, 兩組之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。在G1級(jí)膀胱癌中CXCR7 mRNA的表達(dá)量為（1.83±0.36），而G2-G3級(jí)表達(dá)量為（6

4、.33±1.31），兩組之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。②正常組織中CXCR7蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于腫瘤組織,分別為10％（3/30）和85.1％（126/148）。（P<0.01）.CXCR7蛋白在單發(fā)及多發(fā)腫瘤中的高表達(dá)率分別為49.4％（44/89）和71.2％(42/59)，在G1級(jí)、G2級(jí)、G3級(jí)膀胱癌CXCR7蛋白高表達(dá)的陽(yáng)性率分別為34.0％(16/47)、65.8％（48/73）、78.6％（22/28），差異均

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。非肌層浸潤(rùn)性腫瘤和肌層浸潤(rùn)性腫瘤中CXCR7蛋白高表達(dá)的陽(yáng)性率為51.9％和72.7％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。104例非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中，復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組中CXCR7蛋白高表達(dá)的陽(yáng)性率64.1％和32.5％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Kaplan-Merier曲線顯示，CXCR7蛋白高表達(dá)組患者和CXCR7蛋白低表達(dá)組患者的術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存率相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P<0.01）。③

6、人膀胱癌細(xì)胞株T24及J82 CXCR7兩細(xì)胞株均表達(dá)CXCR7蛋白。④成功構(gòu)建出Lenti-CXCR7-HA慢病毒重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，產(chǎn)生高滴度病毒顆粒。⑤慢病毒穩(wěn)定感染人膀胱癌細(xì)胞T24后，經(jīng)G418穩(wěn)定篩選，經(jīng)RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)方法證明該方法顯著上調(diào)了轉(zhuǎn)染組細(xì)胞株CXCR7 mRNA和蛋白的表達(dá)。⑥過(guò)表達(dá)CXCR7組細(xì)胞較空白對(duì)照組，細(xì)胞增殖數(shù)量明顯增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），而空白對(duì)照組細(xì)胞與未處理組之間

7、并無(wú)明顯差異（P>0.05）。⑦過(guò)表達(dá)CXCR7組細(xì)胞較空白對(duì)照組，凋亡率分別為（4.26±0.34）％和（25.44±1.30）％，（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：⑴CXCR7在膀胱癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都有過(guò)表達(dá)。⑵CXCR7的過(guò)表達(dá)與腫瘤的分級(jí)以及腫瘤是否浸潤(rùn)肌層有關(guān)。⑶在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中，CXCR7過(guò)表達(dá)與患者的術(shù)后復(fù)發(fā)呈正相關(guān)。⑷T24及J82中，均有CXCR7 mRNA及