葉酸、DNMT1蛋白表達(dá)及FHIT基因甲基化在宮頸癌變中的作用.pdf

1、目的:
　　 宮頸癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前已明確人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要原因，但并非唯一因素。近年來(lái)的研究表明，葉酸缺乏可增加宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。葉酸是機(jī)體必需的微量營(yíng)養(yǎng)素，它作為體內(nèi)一碳單位的主要供體，參與DNA的甲基化過(guò)程，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。隨著表觀遺傳學(xué)研究的深入，已發(fā)現(xiàn)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中存在DNA甲基化水平和模式的紊亂。鑒于葉酸缺乏和DN

2、A甲基化在宮頸癌變過(guò)程中均有不可忽視的作用，而葉酸與DNA甲基化之間又存在不可分割的內(nèi)在聯(lián)系，提示葉酸可能通過(guò)對(duì)甲基化的調(diào)節(jié)而作為協(xié)同因子在宮頸癌變過(guò)程中發(fā)揮作用。本研究選擇不同宮頸病變的婦女為研究對(duì)象，在界定其HPV感染和機(jī)體葉酸水平的前提下，檢測(cè)在DNA甲基化中發(fā)揮重要作用的DNMT1蛋白的表達(dá)改變，并選擇抑癌基因FHIT為靶基因，以評(píng)價(jià)葉酸、DNMT1蛋白表達(dá)、FHIT基因CpG島甲基化與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及其在宮頸癌變中的相

3、互作用，為宮頸癌的預(yù)防和控制提供新思路。
　　 方法:
　　 以人群研究為基礎(chǔ)，采用多組比較的病例對(duì)照研究方法，選擇2008年6月～2009年8月在山西省腫瘤醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)確診的宮頸鱗狀細(xì)胞癌新發(fā)病人100例作為病例組1，選擇同一時(shí)期在山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦科就診的宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)患者101例和慢性宮頸炎患者109例分別作為病例組2和對(duì)照組。病例與對(duì)照均需排除營(yíng)養(yǎng)性巨幼細(xì)胞貧血、溶血性疾病、白血病、局限性腸炎、肝

4、臟疾病、其他腫瘤患者，以及三個(gè)月內(nèi)B族維生素使用者。
　　 通過(guò)調(diào)查問(wèn)卷收集研究對(duì)象人口學(xué)特征、生殖因素等相關(guān)資料，在知情同意的原則下，采集研究對(duì)象空腹靜脈血以及手術(shù)或陰道鏡活檢宮頸組織。采用放射免疫法(RIA)檢測(cè)血清葉酸；通過(guò)PCR擴(kuò)增法檢測(cè)HPV16的感染狀況；采用Western Blotting方法檢測(cè)DNMT1蛋白的表達(dá)量；應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)方法檢測(cè)FHIT基因CpG島的甲基化狀況。使用SPSS16.0軟

5、件分析數(shù)據(jù)，正態(tài)分布資料用t檢驗(yàn)和方差分析，偏態(tài)分布資料用Wilcoxon檢驗(yàn)和Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，分類(lèi)資料采用x2檢驗(yàn)，趨勢(shì)x2檢驗(yàn)，相關(guān)因素分析采用單因素分析和多因素非條件Logistic回歸分析，交互作用采用叉生分析等。
　　 結(jié)果:
　　 (1)HPV16感染率在宮頸癌組(61.0％)和CIN組(38.6％)均顯著高于對(duì)照組(20.2％)，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=36.29，P=0.000；x2=

6、8.64，P=0.003)。
　　 (2)血清葉酸水平在宮頸癌組(1.86±2.14 ng/ml)明顯低于對(duì)照組(3.19±2.50 ng/ml)，但在CIN組(2.60±2.46 ng/ml)和對(duì)照組間無(wú)顯著差別；隨著血清葉酸水平的下降，宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)逐漸增加(x2趨勢(shì)1=14.842，P1=0.000)。
　　 (3)DNMT1蛋白的表達(dá)水平在宮頸癌組(2.93±0.36)和CIN組(1.87±0.33)均明顯高于

7、對(duì)照組(0.89±0.30)，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 (4)FHIT基因CpG島甲基化率在宮頸癌組(39.0％)顯著高于對(duì)照組(2.8％)(x2=42.67，P=0.00)，但在CIN組(3.0％)和對(duì)照組間無(wú)明顯差別(x2=0.00，P=1.00)。隨著宮頸病變的進(jìn)展，F(xiàn)HIT基因CpG島的甲基化率逐漸增高(x2趨勢(shì)=53.56，P=0.000)；
　　 (5)對(duì)血清葉酸與DNMT1蛋白表達(dá)的生物學(xué)交互作用的定性分

8、析顯示：在宮頸癌和CIN中，這兩個(gè)因素間均存在正相加交互作用。
　　 (6)在宮頸癌中，血清葉酸與FHIT基因CpG島甲基化之間、DNMT1蛋白表達(dá)與FHIT基因甲基化之間均顯示有正相加交互作用，但在CIN中，均未發(fā)現(xiàn)他們的正相加作用。
　　 (7)在宮頸癌中，HPV16、血清葉酸、FHIT基因CpG島甲基化、血清葉酸*DNMT1蛋白表達(dá)、文化程度、首次性行為年齡及孕次作為主要因素進(jìn)入回歸模型；在CIN中，HPV16感染

9、、首次性行為年齡及孕次3個(gè)因素被引入回歸方程。
　　 結(jié)論:
　　 (1)血清葉酸水平低是宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，DNMT1蛋白高表達(dá)對(duì)宮頸癌和CIN的發(fā)生均具有重要作用，兩者在宮頸癌的發(fā)生中可能存在協(xié)同作用，但在CIN的發(fā)生中未發(fā)現(xiàn)兩者的協(xié)同作用。
　　 (2)FHIT基因CpG島甲基化可增加宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)。
　　 (3)HPV16感染、首次性行為年齡小、孕次多是宮頸癌和CIN發(fā)生共同的危險(xiǎn)因素，文化程