非小細(xì)胞肺癌DNMT1與抑癌基因啟動(dòng)子甲基化及表達(dá)的研究.pdf

1、目的：DNA甲基化是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1催化（DNMT1）的一種表觀遺傳學(xué)上的 DNA修飾酶。本研究的目的是探討人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株在離體及在體生長(zhǎng)下DNMT1基因、蛋白的表達(dá)及其對(duì)抑癌基因甲基化狀態(tài)的影響。
　　方法：人肺鱗癌細(xì)胞株A549，H838在體外生長(zhǎng)并種植于裸鼠皮下成瘤，兩種細(xì)胞株均使用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑（5-AZA-CdR）和/或組蛋白脫乙酰酶抑制劑（MS-275）進(jìn)行治療治療，即分為四組：對(duì)照組、5-AZA-C

2、dR單獨(dú)治療組、MS-275單獨(dú)治療組及聯(lián)合治療組。表觀治療結(jié)束后，收集細(xì)胞，分別提取總DAN、蛋白及RNA。DNMT1及腫瘤抑癌基因（RASSF1A, ASC, APC, MGMT, CDH13,DAPK, ECAD, P16, GATA4等）蛋白水平的表達(dá)用Western blotting進(jìn)行檢測(cè)；DNMT1及腫瘤抑癌基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)用RT-qPCR進(jìn)行檢測(cè)；腫瘤抑癌基因（RASSF1A, ASC, APC, MGMT, CDH1

3、3,DAPK, ECAD, P16, GATA4等）啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)利用甲基化特異性PCR（MSP）進(jìn)行檢測(cè)；細(xì)胞的生長(zhǎng)使用CCK-8進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：⑴經(jīng)5-AZA-CdR和MS-275的表觀治療后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 DNMT1基因 mRNA的表達(dá)降低。⑵在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中5-AZA-CdR和MS-275的表觀遺傳學(xué)治療可抑制 DNMT1蛋白水平的表達(dá)。⑶在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表觀遺傳治療可導(dǎo)致抑癌基因發(fā)生去甲基化，從而使相

4、關(guān)抑癌基因恢復(fù)表達(dá)。⑷在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表觀遺傳治療可抑制其增殖。⑸在裸鼠體內(nèi)，5-AZA-CdR及MS-275的表觀遺傳治療可明顯抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)。⑹在裸鼠體內(nèi)，5-AZA-Cd及MS-275的表觀遺傳治療可使抑癌基因RASSF1A、ASC及APC發(fā)生去甲基化，從而恢復(fù)其表達(dá)。
　　結(jié)論：經(jīng)DNA甲基化治療后隨著 DNMT1表達(dá)的降低，腫瘤抑癌基因的甲基化狀態(tài)受DNMT1基因的調(diào)控。在裸鼠，腫瘤抑癌基因的去甲基化抑制腫瘤組織