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文檔簡介
1、背景與目的:TIF1γ(Transcription intermediary factor1 gamma)屬于轉(zhuǎn)錄中介因子1家族的成員,可干擾TGF-β/Smad信號(hào)通路,抑制TGF-β介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo),且TIF1γ在多種腫瘤細(xì)胞的表達(dá)減弱和缺失表明TIF1γ在癌癥的發(fā)生發(fā)展過程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIF1γ在non-small cell lung cancer(NSCLC)與組織中的表達(dá)差異以確定TIF1γ與肺癌發(fā)生關(guān)系以及
2、肺癌細(xì)胞中TIF1γ表達(dá)調(diào)控的潛在機(jī)制。
方法:選取13例NSCLC患者癌組織以及對應(yīng)的癌旁組織樣本,培養(yǎng)正常支氣管上皮細(xì)胞HBE和NSCLC細(xì)胞株:A549和95C。運(yùn)用Real-time PCR和westernblot檢測細(xì)胞與組織中TIF1γ基因的表達(dá),并用ImageJ灰度掃描軟件計(jì)算TIF1γ的相對表達(dá)量。通過DNA測序的方法檢測TIF1γ基因啟動(dòng)子區(qū)域突變情況,并采用Bisulfite-sequencing PCR(
3、BSP)克隆測序方法檢測TIF1γ基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化情況。
結(jié)果:相對于HBE,TIF1γ mRNA和蛋白在A549和95C中顯著下調(diào)(P<0.05),對13對組織樣本中的TIF1γ mRNA的表達(dá)量檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在9對(69.2%)癌旁組織樣本里TIF1γ mRNA的表達(dá)量高于癌組織樣本(P<0.05)。啟動(dòng)子活性分析結(jié)果表明TIF1γ基因核心啟動(dòng)子位于啟動(dòng)子-282--30區(qū)段。突變檢測包含核心啟動(dòng)子的TIF1γ基因-28
4、7--5區(qū)段發(fā)現(xiàn)在各細(xì)胞株中該區(qū)段沒有突變發(fā)生。經(jīng)BSP克隆測序方法分析發(fā)現(xiàn)在TIF1γ基因啟動(dòng)子-287--5區(qū)域里存在5個(gè)可被甲基化的CpG位點(diǎn)(-214、-128、-124、-65和-55)。但這些CpG位點(diǎn)的甲基化頻率在NSCLC細(xì)胞株中相比HBE沒有顯著差異。
結(jié)論:TIF1γ在NSCLC的發(fā)生中可能起抑癌的作用,TIF1γ基因核心啟動(dòng)子位于啟動(dòng)子-282--30區(qū)段,TIF1γ基因啟動(dòng)子區(qū)域-287--5在正常細(xì)胞
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