胃癌組織中ERCC1基因的高甲基化及DNMT1的表達(dá).pdf

1、目的:
　　通過對(duì)胃癌及癌旁組織基因表達(dá)情況的檢測(cè)，分析ERCC1（人切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1）基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的狀況及DNMT1（DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1）基因的表達(dá)在胃癌演變過程中的作用。在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中，胃癌是主要的致死疾病之一，大部分患者診斷時(shí)已經(jīng)為晚期，所以胃癌的早期診斷尤為重要。胃癌產(chǎn)生與演變是一個(gè)復(fù)雜的病變過程，它受到多因素的共同調(diào)控，其中癌基因的非正常激活與抑癌基因轉(zhuǎn)錄功能的失活是兩個(gè)極其重要的原因，表觀遺傳學(xué)層面上

2、的改變?cè)诓∽冞^程中發(fā)揮著重要的功能，最普遍的表觀遺傳學(xué)改變就是DNA甲基化。
　　方法:
　　(1)青島市市立醫(yī)院2014年1月至2014年10月經(jīng)普外科切除的新鮮腫瘤標(biāo)本共60例，經(jīng)病理組織學(xué)診斷為為原發(fā)性胃癌，術(shù)前未行抗腫瘤治療，比如放療化療，擁有完整的臨床資料。癌組織取自癌病變區(qū)域的中心，并取距離癌組織至少5cm區(qū)域組織作為癌旁組織。分離收集到的標(biāo)本組織中的DNA，然后使用亞硫酸鈉修飾方法對(duì)所得的DNA進(jìn)行裝飾，采用聚

3、合酶增鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)對(duì)上述DNA進(jìn)行擴(kuò)大增殖。使用MSP方法對(duì)胃癌組織及癌旁組織ERCC1基因甲基化情況進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，并檢驗(yàn)ERCC1和DNMT1表達(dá)水平。分析探討在腫瘤演變過程中兩個(gè)基因的所發(fā)揮的功效。
　　(2)對(duì)收集到的60例標(biāo)本組織中的RNA進(jìn)行分離，然后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，形成單鏈DNA，接著應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)大增殖，用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚合酶鏈RT-PCR技術(shù)對(duì)基因ERCC1、DNMT1的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢驗(yàn)。
　　(3)

4、用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)癌組織和癌旁組織中的ERCC1及DNMT1蛋白表達(dá)水平狀態(tài)，探究它們?cè)谖赴┭葑冞^程中所發(fā)揮的功效。使用SPSS17.0軟件對(duì)試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，使用x2檢驗(yàn)方法于計(jì)數(shù)資料之間的比較中，組間的比較t檢驗(yàn)進(jìn)行處理;以P＜0.05作為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　(1)應(yīng)用MSP反應(yīng)檢測(cè)出胃癌組織ERCC1啟動(dòng)子區(qū)甲基化率為68.3％明顯高于正常組織23.3％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

5、001)。
　　(2)應(yīng)用RT-PCR反應(yīng)方法進(jìn)行檢測(cè)，在ERCC1表達(dá)下調(diào)的胃癌組織中DNMT1的表達(dá)高于ERCC1表達(dá)正常的組織，表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(3)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢驗(yàn)，ERCC1在癌旁組織中的表達(dá)陽性率為93.3％，明顯高于胃癌組織56.7％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=21.21，P＜0.001)。DNMT1在胃癌組織中的表達(dá)陽性率為71.7％，明顯高于癌旁組織16.7％，差異有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　(4)胃癌組織中ERCC1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與ERCC1 mRNA表達(dá)之間的關(guān)系，在41例ERCC1 mRNA陰性表達(dá)的胃癌組織中，檢測(cè)出38例該基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化，而在ERCC1 mRNA表達(dá)陽性的19例胃癌組織中，僅檢測(cè)出3例基因啟動(dòng)子甲基化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　(5)胃癌組織中ERCC1與DNMT1蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性分析，胃癌組織中的ERCC1與DNMT1蛋

7、白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.001).
　　結(jié)論:
　　(1)在胃癌組織中，可發(fā)現(xiàn)ERCC1基因啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生高甲基化改變，并且同時(shí)伴有該基因蛋白的表達(dá)減低，和胃癌的發(fā)生存在一定的關(guān)系。
　　(2)胃癌組織中ERCC1基因的mRNA表達(dá)低于癌旁組織，mRNA的低表達(dá)與ERCC1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化有關(guān)。
　　(3)胃癌組織中的ERCC1與DNMT1蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，胃癌組織中的DNMT1的mRNA及蛋白表