人ERCC1基因的克隆、表達及功能的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、腦是體內氧代謝率最高的器官,在正常的生理狀態(tài)下產生大量的DNA損傷.損傷的DNA可以引起基因突變和細胞周期停滯,最后導致腫瘤的發(fā)生和細胞凋亡.因此及時高效的DNA修復系統(tǒng)在維持基因組的穩(wěn)定性和細胞的正常生理功能中起了關鍵的作用.ERCC1作為一種重要的核苷酸剪切修復因子參與了多種損傷DNA的修復過程.為了進一步了解ERCC1蛋白的功能,實驗首先克隆了人的ERCC1基因,經(jīng)測序分析后與公開發(fā)表的序列基因一致.隨后構建了原核表達質粒pGEX

2、-4T-1-ERCC1和真核表達質粒pEGFP-N1-ERCC1,并分別在大腸桿菌BL21和PC12細胞上實現(xiàn)了外源性ERCC1基因的表達.其后在腦缺血后的大鼠側腦室內微量注射pEGFP-N1-ERCC1質粒,在缺血再灌3天后觀察到EGFP-ERCC1融合蛋白在大鼠腦同的高表達.小結:該實驗成功克隆了人類的ERCC1基因,構建了真核表達載體,并在大鼠腦內有效地表達了外源性ERCC1蛋白.實驗發(fā)現(xiàn)ERCC1表達下降與衰老密切相關,同時腦缺

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