restin基因的克隆及初步功能研究.pdf

1、該文利用"基于PCR的減法雜交技術(shù)"研究了維甲酸誘導(dǎo)早幼粒白血病細(xì)胞分化和凋亡時(shí)所表達(dá)的特異基因,得到了一系列新基因克隆片段,該研究是在此基礎(chǔ)之上對(duì)其中一個(gè)基因片斷(Apr1,GeneBank Accession NumberAF143235)進(jìn)行全長(zhǎng)cDNA克隆,并研究其生物學(xué)功能.利用生物信息學(xué)技術(shù),通過EST拼接,對(duì)Aprl序列進(jìn)行了延長(zhǎng),得到1474bp長(zhǎng)的序列.采用Clontech的12組織mRNA膜進(jìn)行Northern雜交分

2、析,發(fā)現(xiàn)該cDNA片斷全長(zhǎng)約1.5kb,這樣所拼接的序列實(shí)際接近c(diǎn)DNA全長(zhǎng).為了驗(yàn)證該拼接序列的正確性,利用PCR技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行擴(kuò)增并再測(cè)序,發(fā)現(xiàn)拼接序列在編碼區(qū)少一個(gè)堿基,正確序列長(zhǎng)為1475bp,同時(shí)對(duì)基因數(shù)據(jù)庫(kù)序列進(jìn)行了更正,該序列已經(jīng)得到GeneBank的正式認(rèn)可,認(rèn)可號(hào)為NM_ 014061.利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Restin在細(xì)胞中的表達(dá)分布,發(fā)現(xiàn)該基因表達(dá)蛋白主要分布在細(xì)胞核膜周圍.利用含綠色熒光蛋白的真核融合表達(dá)載體,