水茄(Solanum torvum)StUBCc基因的克隆及功能初步分析.pdf

1、茄子黃萎病是危害茄子的主要土傳病害之一，它會引起茄子減產(chǎn)造成重大經(jīng)濟損失。栽培種茄子材料中沒有有效的抗黃萎病茄子資源，高抗材料均為野生種。茄子近緣野生種水茄(Solanumtorvum)具有較強的抗黃萎病能力，幾乎接近免疫的程度，從水茄中克隆與黃萎病抗性相關的基因，對改善茄子抗病性具有重要價值。本研究以課題組前期構建的黃萎病菌侵染下水茄的抑制差減文庫(SSH)為基礎，對其中的159條差異序列重新進行序列比對，挑取可能與抗病相關的序列進行

2、差異表達驗證及表達模式分析。利用RACE技術克隆可能與抗病相關的候選ESTs的基因全長，并利用VIGS方法對克隆得到的全長基因進行功能初步分析。主要研究結果如下:
　　1.利用qRT-PCR方法分析從SSH-cDNA文庫中挑取的12條可能與抗病相關的泛素（4條）、激素（4條）和抗病蛋白（4條）的ESTs序列，驗證其在黃萎病菌侵染下不同時間點的差異表達性，分析表達模式。結果表明，12條ESTs在黃萎病菌侵染下的表達量與對照相比不同。

3、在侵染2h內(nèi)，每條EST在黃萎病菌處理的相對表達量與對照相差不大;侵染4h后，表達量都高于對照，上調(diào)表達。
　　2.采用RACE技術克隆獲得了水茄StUBCc基因全長序列，對其進行功能初步分析。序列分析顯示StUBCc基因全長756 bp，開放閱讀框為459 bp，編碼152個氨基酸，具有UBCc基因家族結構域。同源性分析發(fā)現(xiàn)StUBCc基因與葡萄的泛素結合酶E2-2(UBC2)的同源性最高，達99％。系統(tǒng)進化樹結果顯示水茄中該基

4、因編碼的蛋白與葡萄聚在同一分支，親緣關系最近，其次為擬南芥和矮牽牛。熒光定量PCR分析結果顯示，StUBCc基因表達量在水茄中受到黃萎病菌侵染明顯增加，在侵染后6h達到最大值，其表達量是對照的6.79倍，推測該基因可能參與病原菌侵染初期的應答過程。
　　3.利用VIGS方法在水茄中初步分析了StUBCc基因的功能。選取301 bp的基因沉默片段，利用同源重組法（In-Fusion技術），成功構建了StUBCc基因沉默的表達載體，用