人的新基因PCIA1的全長克隆和初步功能研究.pdf

1、目的：2003年底，人類基因組測序計劃已經(jīng)完成，2004年在Nature雜志上公布了修正的人類基因組圖譜，人類基因組計劃己從結(jié)構(gòu)基因組時代邁入功能基因組時代，未來主要任務(wù)就是定位人類基因，研究它們的生物學(xué)功能及基因間的相互作用等。最近研究發(fā)現(xiàn)人類總的基因數(shù)目為20,000—25,000個，比以前所估計的要少得多，但大多數(shù)基因功能未知。因此，克隆新基因并闡明這些基因的功能及其基因間的相互作用顯得尤為重要。本研究在篩選新的靶分子時獲得了一條

2、人的新基因序列PCIAl，為盡快獲得新基因的功能提示，需獲取新基因的全長序列，進行初步的生物信息學(xué)分析，并進行初步的功能研究。 方法：本研究在重組cDNA表達文庫的血清學(xué)分析(Serological analysis ofrecombinant cDNA expression library，SEREX)技術(shù)基礎(chǔ)上，篩選到一個基因部分片段，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)此基因為人的新基因的片段。我們采用RACE(Rapid Amplific

3、ation of cDNA Ends)技術(shù)結(jié)合EST(ExpressedSequence Tags)序列拼接技術(shù)獲得了新基因PCIA1的全長cDNA序列，用RP-RCR技術(shù)檢測了該新基因的人的組織表達譜，以PCIAl和GFP融合蛋白及免疫組織化學(xué)檢測PCIAl基因的亞細(xì)胞定位，并結(jié)合多種生物信息學(xué)手段對其可能的性質(zhì)和功能進行初步的分析和預(yù)測。進而，為進一步研究該基因的功能，我們將PCIA1基因連接至原核表達載體pQE30，表達和純化了P

4、CIAl基因的蛋白，制備了PCIAl的多克隆抗體；同時，進一步探索PCIAl與腫瘤生長之間的關(guān)系，將PCLAl基因連入真核表達載體pcDNA3.1中，轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達株。并將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和對照細(xì)胞接種裸鼠，觀測成瘤性。同時利用全基因組基因芯片檢測與：PCLAl相關(guān)的基因變化。 結(jié)果：獲得了人的新基因PCIAl全長cDNA序列，進行了初步的生物信息學(xué)分析，通過GFP融合蛋白技術(shù)和免疫組化的方法將PCIAl基因定位