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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:克隆家族性急性髓系白血病相關(guān)新基因eDNA全長(zhǎng),在分子水平上探討急性白血病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。 方法:應(yīng)用抑制性消減性雜交(suppressiOn subtractivehybridization,SSH)構(gòu)建家族性急性髓系白血病eDNA抑制性消減文庫(kù),獲得28個(gè)基因克隆,測(cè)序后經(jīng)GenBank同源對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn)11條為未知基因的EST片斷,以其中的一條未知新EST zywB-87(GenBank注冊(cè)號(hào):CV973101)為基
2、礎(chǔ):1、應(yīng)用一步法逆轉(zhuǎn)錄PCR(0neStep RT-PCR)驗(yàn)證其差異表達(dá);2、應(yīng)用SMART-eDNA末端快速擴(kuò)增法(SMART-rapid amplification of eDNA ends,SMART-RACE)克隆家族性急性髓系白血病相關(guān)新基因的全長(zhǎng)eDNA;3、應(yīng)用生物信息學(xué)方法對(duì)家族性急性髓系白血病相關(guān)新基因的功能進(jìn)行初步分析。 結(jié)果:獲得了家族性急性髓系白血病相關(guān)新基因全長(zhǎng)eDNA,該基因定位于染色體1q31.
3、3,eDNA全長(zhǎng)2313bp,開(kāi)放讀碼框(open:reading frarne,ORF)為249bp,編碼82個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),Blast檢索為功能未知的新基因,已被GenBank收錄,并被命名為FAMLF,核酸注冊(cè)號(hào)為EF413001,蛋白質(zhì)注冊(cè)號(hào)為ABN58747。 結(jié)論: 1、成功獲得家族性急性髓系白血病相關(guān)新基因FAMLF的eDNA全長(zhǎng),染色體定位于1q31.3,編碼82個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。 2、FAML
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