急性髓系白血病WT1及其相關(guān)基因表達(dá)的意義.pdf

1、研究目的：
　　 探討成人急性髓系白血病WT1和IRF-8表達(dá)情況與臨床療效指標(biāo)的關(guān)系，探索它們對(duì)指導(dǎo)急性髓系白血病治療、預(yù)后判斷的價(jià)值。
　　 研究方法：
　　 1、在患者知情同意的原則下，收集中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院白血病診療中心的成人急性髓系白血病骨髓標(biāo)本；
　　 2、分離骨髓標(biāo)本中的單個(gè)核細(xì)胞，提取總mRNA，逆轉(zhuǎn)為cDNA待測(cè)；
　　 3、提取K562和U937細(xì)胞系的總mRNA，逆轉(zhuǎn)為

2、cDNA，并通過一系列步驟轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量測(cè)定患者骨髓標(biāo)本中WT1和IRF-8的表達(dá)水平；
　　 4、結(jié)合患者臨床資料，分析WT1和IRF-8與患者臨床特征、治療反應(yīng)及長期預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1、共收集138例初診AML患者的標(biāo)本，中位WT1表達(dá)水平為4560(31～36934)copies/104ABL，中位IRF-8表達(dá)水平為2500(17-45030)copies/104ABL。性

3、別、年齡、起病時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)、FLT3狀態(tài)與WT1、IRF-8表達(dá)水平無顯著關(guān)聯(lián)。根據(jù)NCCN關(guān)于AML預(yù)后分組的建議，將患者染色體核型分為低危組、中危組和高危組（除外3例未見分裂相的），三組間初診WT1、IRF-8和誘導(dǎo)后WT1、IRF-8無明顯差異；兩組間配對(duì)比較，可見低危組患者誘導(dǎo)化療后WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)，即log10(初診WT1/104ABL)-log10(誘導(dǎo)后WT1/104ABL)，顯著高于中危組患者(0.970vs0.587,

4、P=0.033);
　　 2、117例患者進(jìn)行了誘導(dǎo)化療后評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)WT1在誘導(dǎo)化療后顯著降低(3.601vs2.855，P=O.OOO)，IRF-8在誘導(dǎo)化療后顯著升高(3.398vs3.961，P=0.000)。誘導(dǎo)化療后完全緩解(CR)患者的WT1水平顯著低于未緩解(NR)患者(2.737vs3.536，P=0.000)，IRF-8表達(dá)水平顯著高于NR患者(4.003vs3.723，P=0.031);達(dá)到CR的患者，發(fā)現(xiàn)其

5、WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)顯著高于NR患者(0.860vs0.092，P=0.001);
　　 3、將101例非M3患者按誘導(dǎo)方案中是否含有中劑量阿糖胞苷分為中劑量組和標(biāo)準(zhǔn)劑量組，發(fā)現(xiàn)中劑量組誘導(dǎo)后WT1水平呈現(xiàn)較低趨勢(shì)，但尚未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(2.567vs.2.872,P=0.105);
　　 4、93例非M3患者進(jìn)行了長期生存分析，發(fā)現(xiàn)初診WT1、誘導(dǎo)后WT1、WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)和誘導(dǎo)后IRF-8水平對(duì)患者總體生存的影響有顯

6、著意義(P分別為0.004，0.039，0.008和0.047)。初診WT1高表達(dá)、誘導(dǎo)后WT1高表達(dá)、WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)不足0.5和誘導(dǎo)后IRF-8低表達(dá)的患者總體生存情況較差(1.5年總體生存率分別為33.6％vs71.9%,38.5%vs68.9%,33.9%vs68.7%,47.0%vs61.5%);初診時(shí)的WT1水平與患者的無復(fù)發(fā)生存情況有顯著關(guān)系，高表達(dá)WT1的患者復(fù)發(fā)可能性大(1.5年無復(fù)發(fā)生存率為82.1%vs52.3%，

7、P=0.036)?；貧w分析證實(shí)，初診時(shí)WT1高水平表達(dá)和WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)不足0.5是影響總體生存(P分別為0.011和0.003)及無復(fù)發(fā)生存(P分別為0.018和0.032)的顯著不良預(yù)后因素；
　　 5、按NCCN預(yù)后分組標(biāo)準(zhǔn)和預(yù)后積分分組，未發(fā)現(xiàn)低危組、中危組和高危組在初診和誘導(dǎo)后WT1水平、初診和誘導(dǎo)后IRF-8水平、WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)等指標(biāo)上的顯著差異：
　　 6、11例APL患者的39個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了PML/RA

8、Rα和WT1配對(duì)比較，發(fā)現(xiàn)在化療過程中PML/RARα下降的同時(shí)，伴隨WT1下降，二者趨勢(shì)相符，提示W(wǎng)T1具有與PML/RARα類似的對(duì)APL微小殘留病監(jiān)測(cè)價(jià)值。
　　 7、25例AML伴t(8;21)患者的67個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了AML/ETO和WT1配對(duì)比較。將這些患者劃分為三組：持續(xù)CR且伴隨WT1下降的17例；復(fù)發(fā)且伴隨WT1升高的6例；持續(xù)CR但WT1無下降或復(fù)發(fā)但WT1無升高的2例。WT1與AML1/ETO變化趨勢(shì)一致的比

9、例為92.0%，提示W(wǎng)T1具有與AML1/ETO類似的伴t(8;21)-AML微小殘留病監(jiān)測(cè)價(jià)值；
　　 8、16例無特殊重現(xiàn)性分子生物學(xué)標(biāo)記的患者均在初診、誘導(dǎo)后、治療第3、6、9、12個(gè)月采集到骨髓標(biāo)本，其中5例患者在出現(xiàn)臨床復(fù)發(fā)前的3至4個(gè)月檢測(cè)到WT1顯著升高(即后一次檢測(cè)較前一次檢測(cè)水平升高大于等于0.5對(duì)數(shù)級(jí)，P=0.035);
　　 9、患者標(biāo)本中的WT1和IRF-8水平呈中等強(qiáng)度反相關(guān)(相關(guān)系數(shù)-0.29

10、5，P=0.011)。
　　 結(jié)論：
　　 1、AML患者初診中位WT1表達(dá)水平為4560(31～36934)copies/104ABL，顯著高于正常對(duì)照組的98(23～140)copies/104ABL。誘導(dǎo)治療后達(dá)CR的患者，WT1表達(dá)水平顯著降低，IRF-8表達(dá)水平顯著升高；
　　 2、AML隨訪過程中，有下列特征者可以取得較好的OS:初診WT1表達(dá)水平低的；誘導(dǎo)后WT1表達(dá)水平低的；WT1下降對(duì)數(shù)級(jí)高的；