正常人及急性髓系白血病患者骨髓細(xì)胞中WT1基因表達(dá)及其異構(gòu)體比例研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文正常人及急性髓系白血病患者骨髓細(xì)胞中WT1基因表達(dá)及其異構(gòu)體比例研究姓名：徐菁申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：血液內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：王宏偉20070512血西匿辯太擘博士學(xué)位淪文CD34cD38。CDl23’細(xì)胞，檢測(cè)其中WTI表達(dá)水平及其異構(gòu)體構(gòu)成比例，同時(shí)與正常干細(xì)胞對(duì)比分析，旨在為進(jìn)一步探討WTI在白血病發(fā)生機(jī)制中的作用奠定基礎(chǔ)。第一部分正常人骨髓不同細(xì)胞群中WTl基因表達(dá)及其異構(gòu)體比例研究I、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立以陽性標(biāo)

2、準(zhǔn)品進(jìn)行四條標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，其相關(guān)系數(shù)均達(dá)0996以上。采用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR方法檢測(cè)18例正常人骨髓標(biāo)本中CD34CD38。CDl23。細(xì)胞群(干細(xì)胞)，CD34CD38細(xì)胞群(祖細(xì)胞)、CD33十CDl4細(xì)胞群(單核細(xì)胞)、CDl5CDllb細(xì)胞群(粒細(xì)胞)、CD20“CD5‘細(xì)胞群(B細(xì)胞)，CD20‘CD5細(xì)胞群(T細(xì)胞)中總wTl、vcrl(Z7AA)及WTI(KTS)的表達(dá)。由于17AA與KTS的選擇縫剪接應(yīng)當(dāng)是彼此獨(dú)立

3、的，因此wTl四種異構(gòu)體各自的比例可以通過17AA，17從一、KTS、l(TS一之問比例相乘而計(jì)算出來。2、正常骨髓不同細(xì)胞亞群WTl表達(dá)水平與陽性對(duì)照K652細(xì)胞系(467103295)相比，CD34CD38一CDl23。、CD34CD38、CDl5CDIlb和CD33CDl4細(xì)胞群中均存在wTl的低表達(dá)且依次逐漸降低，其中CD34CD38CDl23細(xì)胞群表達(dá)水平最高，為792104107，CD33“CDl4細(xì)胞群表達(dá)水平最低，為70

4、810。125。在CD20CD5和C020CD5細(xì)胞群未檢測(cè)到wTl表達(dá)。3、正常骨髓不同細(xì)胞亞群17AA、KTS異構(gòu)體表達(dá)水平及其比例每一細(xì)胞亞群中17AA、KTS兩類異構(gòu)體表達(dá)水平高低與其總wTl的表達(dá)趨勢(shì)一致，也表現(xiàn)為CD34‘C038CDl23細(xì)胞群表達(dá)水平最高，CD33CDl4細(xì)胞群表達(dá)水平最低。正常人骨髓中CD34CD38CI)123’和CD34cD38細(xì)胞群以17從、KTs為主；而在CD3TCDl4和CDl5℃D1lb細(xì)胞

5、群中17AA、KTS兩類異構(gòu)體的比例明顯下降，其中以17AA比例下降更為顯著。4、正常骨髓不同細(xì)胞亞群WTl四種異構(gòu)體表達(dá)水平及比例K562紹胞株、于細(xì)胞及祖細(xì)胞群均以wTI，／)異構(gòu)體表達(dá)為主，所占比例分別為040009，O37003，032O05組間比較有顯著性差異(尸O05)；粒細(xì)胞和單核細(xì)胞群中則以WTl(／)異構(gòu)體比例為主，所占比例分別為039O04。036005。第二部分HL60細(xì)胞系誘導(dǎo)分化過程中WTl基因及其異構(gòu)體比例變