ADAM23在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與啟動(dòng)子甲基化相關(guān)性的研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一。在歐美國家已成為主要的死亡原因之一，其主要原因是肺癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制尚未完全清楚。其中細(xì)胞內(nèi)癌基因的活化和/或抑癌基因的失活是導(dǎo)致肺癌發(fā)生的主要原因。最近研究表明，表觀遺傳學(xué)的改變在肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，其中DNA甲基化修飾異常所導(dǎo)致的抑癌基因的沉默在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵性作用。因此，研究新的抑癌基因在肺癌癌變中的功能失調(diào)及其作用機(jī)制，對于闡明肺癌的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療具有重要意義

2、。去整合素-金屬蛋白酶23(ADAM23)基因?qū)儆贏DAM家族成員，是一種跨膜糖蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞間及細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附融合，在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中可特異性激活其整合素受體avβ3，從而促進(jìn)腫瘤新生血管的生成，加速腫瘤細(xì)胞的生長和遷移。近來研究報(bào)道ADAM23作為一種抑癌基因，其表達(dá)缺失與乳腺癌、胃癌、胰腺癌、喉癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，其機(jī)制與該基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化修飾異常高度相關(guān)。然而，ADAM23在非小細(xì)胞肺

3、癌(NSCLC)中的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化修飾情況，以及在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，目前國內(nèi)外未見相關(guān)報(bào)道。本研究通過分析ADAM23在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義，揭示ADAM23在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并對其啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析，揭示其表達(dá)下調(diào)的機(jī)制，為肺癌的治療和預(yù)后判斷提供新的靶標(biāo)。
　　 目的：檢測ADAM23、α vβ3在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系；分析ADAM23基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化

4、情況與其表達(dá)的關(guān)系，為揭示ADAM23在非小細(xì)胞肺癌發(fā)病中的作用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和RT-PCR方法檢測52例非小細(xì)胞肺癌及其配對癌旁組織和8例良性病變組織中ADAM23、α vβ3的表達(dá)，分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。同時(shí)采用Western blotting和RT-PCR的方法檢測ADAM23在肺鱗癌細(xì)胞(SK-MES-1)和肺腺癌細(xì)胞(A549，SPC-Al，LXEP-a-2)中表達(dá)

5、。⑵應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)方法分別在新鮮組織和細(xì)胞中檢測ADAM23基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況，分析其與表達(dá)的相關(guān)性。⑶應(yīng)用去甲基化特異性藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-2’-dC)處理非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，檢測藥物處理前后ADAM23基因的表達(dá)和啟動(dòng)子區(qū)甲基化改變情況。
　　 結(jié)果：①非小細(xì)胞肺癌中ADAM23蛋白的陽性率(38.5％)低于癌旁組織(86.5％)及肺良性病變組織(87.5％)(P(0.05)，而α

6、vβ3蛋白的陽性率(80.8％)高于癌旁組織(26.9％)及肺良性病變組(37.5％)(P<0.05)。ADAM23蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小以及組織學(xué)分型無關(guān)，而與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期關(guān)系密切；α vβ3蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與患者的年齡、性別、組織學(xué)分型以及分化程度無關(guān)，而與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)；RT-PCR結(jié)果顯示ADAM23mRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)略高與癌旁組織和肺

7、良性病變組織，而α vβ3在癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織及肺良性病變組織；ADAM23和α vβ3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(X2=9.026，r=-0.417，P<0.05)。②52例非小細(xì)胞肺癌中和配對癌旁組織及肺良性病變組織中ADAM23甲基化發(fā)生率分別為40.4％(21/52)、7.6％(4/52)和0(0/8)；其中32例ADAM23陰性表達(dá)的肺癌組織中，17例顯示該基因啟動(dòng)子區(qū)存在甲基化；ADAM23基因的表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化呈負(fù)相關(guān)(X2

8、=5.609，r=-0.328，P=0.017)。③在4株肺癌細(xì)胞中，ADAM23在SK-MES-1和A549中的表達(dá)顯著高于SPC-Al和LTEP-a-2細(xì)胞；其中甲基化特異性PCR結(jié)果顯示SPC-Al，LTEP-a-2存在甲基化，僅甲基化引物擴(kuò)增出產(chǎn)物，而SK-MES-1和A549僅非甲基化引物擴(kuò)增出產(chǎn)物。④5-Aza-2’-dC藥物處理SPC-A1，LTEP-a-2細(xì)胞三天后，ADAM23表達(dá)顯著增高且甲基化水平降低。