DNA啟動(dòng)子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表達(dá)中的影響.pdf

1、目的： 明確脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase，Syk)在人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(NL9980)，人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(L9981)，人肺腺癌(A549)，人肺鱗癌(YTMLC-9)，人肺小細(xì)胞癌(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。明確Svk在肺癌組織與正常肺組織的表達(dá)情況。 探討人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(NL9980)，人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌(L9981)，人肺腺癌(A549)，人肺鱗癌(YTMLC

2、-9)，人肺小細(xì)胞癌(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株中是否存在Syk基因啟動(dòng)子甲基化，探討基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)Syk的表達(dá)是否具有影響作用。 方法： 體外培養(yǎng)人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(NL9980)，人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(L9981)，人肺腺癌細(xì)胞株(A549)，人肺鱗癌細(xì)胞株(YTMLC-9)，人肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株以及Syk基因表達(dá)陽(yáng)性對(duì)照人乳腺腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、Syk基因表

3、達(dá)陰性對(duì)照人乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S)；同時(shí)選取16例肺癌病人的腫瘤組織和相應(yīng)的正常肺組織，提取其RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，選取Syk基因特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，Real-time PCR觀察其表達(dá)情況。 甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(methylation-specific PCR，MSP)檢測(cè)人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(NL9980)，人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(L9981)，人肺腺癌細(xì)胞株(A549)，人肺鱗癌細(xì)胞株(Y

4、TMLC-9)，人肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株Syk基因啟動(dòng)子甲基化是否存在，以Syk基因啟動(dòng)子甲基化陽(yáng)性的人乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S)、Syk基因啟動(dòng)子甲基化陰性的人乳腺腺癌細(xì)胞株(MCF-7)為對(duì)照。以甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮-2'-脫氧胞苷(5-aza-CdR)處理后，檢測(cè)處理前后Syk基因的表達(dá)變化。 結(jié)果： 以Syk表達(dá)陽(yáng)性對(duì)照乳腺腺癌細(xì)胞株(MCF-7)和陰性對(duì)照乳腺管癌細(xì)

5、胞株(MDA-MB-435S)為參考，所培養(yǎng)的5種肺癌細(xì)胞株Syk基因表達(dá)缺失(P<0.05)。16例肺癌病人腫瘤組織與相應(yīng)的正常肺組織相比Syk基因表達(dá)明顯減低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 與Syk啟動(dòng)子甲基化陽(yáng)性對(duì)照乳腺管癌細(xì)胞株(MDA-MB-435S)和陰性對(duì)照乳腺腺癌細(xì)胞株(MCF-7)相比，人低轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(NL-9980)，人高轉(zhuǎn)移肺大細(xì)胞癌細(xì)胞株(L9981)，人肺腺癌細(xì)胞株(A549)，人肺鱗癌細(xì)

6、胞株(YTMLC-9)，人肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株(NCI-H446)5種肺癌細(xì)胞株，除NCI—H446外，其他4種均可檢測(cè)到Syk基因啟動(dòng)子甲基化的存在。對(duì)以上4種甲基化陽(yáng)性的細(xì)胞株應(yīng)用5-aza-CdR脫甲基化后，Syk基因重新表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論： 肺癌細(xì)胞的發(fā)生和生長(zhǎng)可能與Syk的表達(dá)降低或缺失相關(guān)，提示Syk可能是肺癌的一種候選抑癌基因。 肺癌中Syk基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)可能是造成Syk基因表達(dá)沉默的