成熟紅細(xì)胞天齡與功能的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探究成熟紅細(xì)胞正常代謝過程中功能隨細(xì)胞天齡增加而呈現(xiàn)的變化規(guī)律,明確紅細(xì)胞天齡與功能的相互關(guān)系,為進(jìn)一步研究紅細(xì)胞在保存過程中隨保存時(shí)間的延長其功能變化規(guī)律、明確不同保存時(shí)間紅細(xì)胞的功能劑量、實(shí)現(xiàn)紅細(xì)胞量化輸注、為提高紅細(xì)胞輸注的治療效果提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 方法：⑴用非連續(xù)密度梯度分離法分離全血紅細(xì)胞:通過正交設(shè)計(jì)和多元回歸方程分析影響分離效果的各因素,優(yōu)化離心條件。⑵用分光光度法和流式細(xì)胞術(shù)測定紅細(xì)胞天齡:用前面建立優(yōu)

2、化的方法將新鮮全血標(biāo)本離心分離為6個(gè)不同密度層次(1.085,1.088,1.089,1.091,1.092,1.094g/ml)的紅細(xì)胞部分,測定不同層次紅細(xì)胞內(nèi)丙酮酸激酶活性,通過各部分丙酮酸激酶活性與全血紅細(xì)胞丙酮酸激酶活性的比值(Ratio)推測各部分紅細(xì)胞平均天齡；測定各部分紅細(xì)胞膜表面磷脂酰絲氨酸(PS)表達(dá)陽性率,來反映紅細(xì)胞密度與衰老(天齡)的相關(guān)性。⑶紅細(xì)胞功能的檢測:用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測各分層紅細(xì)胞膜表面CR1受體的

3、表達(dá)情況；用紅細(xì)胞自然免疫粘附腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)檢測各分層紅細(xì)胞膜CR1受體粘附腫瘤細(xì)胞的活性；用分光光度法測定各分層紅細(xì)胞內(nèi)2,3-DPG濃度來初步評價(jià)紅細(xì)胞的攜氧能力。
　　 結(jié)果：①結(jié)果表明離心力大小、離心時(shí)間、標(biāo)本紅細(xì)胞平均體積.待分離標(biāo)本紅細(xì)胞濃度、個(gè)體年齡等因素均對分離結(jié)果有影響,其中平均紅細(xì)胞體積(MCV)的影響起主導(dǎo)作用。在離心條件的選擇上,根據(jù)分離效果將分離條件定為3500g,20min,4℃。分離后的各分層紅細(xì)胞,

4、從低密度層至高密度層,其平均紅細(xì)胞體積(MCV)逐漸減小(94.9±3.8fl-87.2±1.5fl),下降了8.11％；平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)呈遞增趨勢(282.5±17.9g/l-316.0±23.7g/l),增加了11.86％。②數(shù)據(jù)提示隨著紅細(xì)胞密度的增加,PS表達(dá)陽性率也逐漸增高:結(jié)合紅細(xì)胞PK比值評價(jià),各分層紅細(xì)胞平均天齡由低密度層至高密度層依次為11.5、46.0、63.8、74.6、80.5、102.2 d。

5、③各天齡段紅細(xì)胞相關(guān)功能檢測結(jié)果顯示：各分層紅細(xì)胞(從低密度層至高密度層)細(xì)胞膜上CR1受體表達(dá)陽性率從73.71±13.62％減少至49.13±21.40％；紅細(xì)胞自然免疫粘附腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)花環(huán)率從61.0±11.7％減至27.0±8.2％；100個(gè)紅細(xì)胞中CD35分子表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)(CD35+)、CR1受體活性(Er％)及天齡(D)三者之間存在一定的相關(guān)性,其具體關(guān)系可用公式表示為:Er％=(61.691+0.11×CD35+-0.3

6、65×D)/100×100％；各分層紅細(xì)胞2,3-DPG濃度從6.15±0.78下降至3.73±0.48(mmol/L erythrocytes)。
　　 結(jié)論：⑴紅細(xì)胞的密度與天齡有著密切相關(guān)性。采用非連續(xù)密度梯度分離法與丙酮酸激酶活性評價(jià)相結(jié)合判斷紅細(xì)胞平均天齡,可作為紅細(xì)胞天齡與功能相關(guān)性研究的參考方法。⑵紅細(xì)胞CR1受體表達(dá)和活性的變化以及2,3-DPG的變化與紅細(xì)胞天齡有著密切相關(guān)性。⑶紅細(xì)胞天齡與其主要功能(攜氧功能