鴨源新城疫病毒的分離鑒定及共對SPF鴨免疫機(jī)能的影響.pdf

1、鴨新城疫(Duck Newcastle disease)是由新城疫病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病，該病以呼吸道、消化道粘膜充血、出血或潰瘍，出現(xiàn)扭頭、轉(zhuǎn)圈等神經(jīng)癥狀為主要特征。傳統(tǒng)理論認(rèn)為新城疫病毒不感染水禽，即使感染也不發(fā)病(Bolte et a1.，2001)，但1997年王永坤等首次報道從病鵝體內(nèi)分離到該病毒后，安徽、山東、浙江、福建等地相繼報道部分鴨群發(fā)生了新城疫(何永強(qiáng)等，2005;張?zhí)璧龋?009;陳少鶯等，2004

2、;張訓(xùn)海等，2001)。目前該病毒對鴨具有較強(qiáng)的致病性，已經(jīng)成為危害我國養(yǎng)鴨業(yè)的重要疫病之一。
　　 本研究2010-2012年在山東、江蘇等地發(fā)病鴨場進(jìn)行了病毒的分離鑒定，共分離到6株病毒。按常規(guī)方法進(jìn)行血凝試驗、血凝抑制試驗，結(jié)果表明6株毒株均具有血凝特性，且血凝特性能被NDV陽性血清所抑制，而不被H9N2、H5N1、EDS-76陽性血清所抑制，初步鑒定6株病毒為NDV，分別命名為SD01株、SD02株、SD03株、SD04

3、株、SD05株和JS01株。根據(jù)GenBank中發(fā)表的鴨源NDV F基因、HN基因序列，共設(shè)計合成了5對引物，采用RT-PCR的方法分別對6株病毒的F基因、HN基因核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增和序列分析。結(jié)果表明:6株病毒F基因的核苷酸同源性為95.9％-99.9％，與F48E9和LaSota株的核苷酸同源性分別為85.5％-87.4％和83.1％-84.8％。HN基因的核苷酸同源性為97.0％-99.4％，與F48E9和LaSota株的核苷酸同

4、源性分別為83.7％-84.4％和81.0％-81.5％。遺傳進(jìn)化分析表明6株病毒均為基因Ⅶd型，說明目前流行的NDV仍以基因Ⅶd型為主，且分離的毒株與傳統(tǒng)疫苗株相比都存在較大的變異。F蛋白氨基酸序列分析表明，裂解位點(diǎn)的氨基酸組成均為112R-R-Q-K-R-F117，具有NDV強(qiáng)毒株的典型分子特征。
　　 選用120只30日齡已免疫H5N1禽流感油乳劑滅活疫苗的SPF鴨，隨機(jī)分為靜脈注射組、點(diǎn)眼滴鼻組和對照組，每組40只。接種

5、NDV后觀察各組鴨的發(fā)病情況及癥狀，于不同時間隨機(jī)剖殺試驗組和對照組鴨，采集血液檢測血液生化和血液常規(guī)指標(biāo)，并測定鴨源NDV對SPF鴨外周血中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和H5N1油乳劑滅活疫苗HI抗體效價的影響以及CD4+/CD8+的動態(tài)變化;采集脾臟、法氏囊，按常規(guī)方法制備石蠟切片、HE染色，觀察病理組織學(xué)變化，TUNEL法檢測脾臟、法氏囊細(xì)胞凋亡情況;以分析不同處理組鴨源NDV對SPF鴨免疫機(jī)能的影響。結(jié)果表明:攻毒后，試驗組SPF鴨發(fā)病率為1

6、00％，死亡率為32.5％，并出現(xiàn)呼吸困難，肺臟出血，腺胃乳頭出血等癥狀及剖檢變化;血常規(guī)檢測結(jié)果顯示，鴨源NDV靜脈注射組和點(diǎn)眼滴鼻組血液中RBC、HGB先降低后顯著升高，PLT、WBC顯著降低且均與對照組差異顯著(P＜0.05);血液生化檢測結(jié)果顯示，ALT、AST、LDH、CK、AMY活性升高而TP含量降低，靜脈注射組和點(diǎn)眼滴鼻組與對照組相比差異顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01);靜脈注射組和點(diǎn)眼滴鼻組的H5N1油乳劑滅