蝴蝶蘭栽培品種（系）細(xì)胞學(xué)、同工酶和RAPD研究.pdf

1、蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)是蘭科(Orchidaceae)植物的一個(gè)重要類群。由于蝴蝶蘭屬與多個(gè)近緣屬,如五唇蘭屬(Doritis)、朵麗蝶蘭屬(Doritaenopsis)之間都有較好的雜交親和性,多數(shù)雜種之間還能進(jìn)行雜交繁育,種內(nèi)、種間異花授粉和長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖造成常用作育種親本的栽培品種遺傳背景復(fù)雜。本研究選取常見的或用作雜交親本的不同花色蝴蝶蘭5個(gè)品種、20個(gè)外引品系和33個(gè)自育品系作為供試材料,對(duì)蝴蝶蘭的細(xì)胞學(xué)、同工酶

2、和RAPD進(jìn)行研究分析,為蝴蝶蘭育種和遺傳改良提供參考依據(jù)。本論文的主要內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.采用酶解去壁法,對(duì)蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)39個(gè)品種(系)進(jìn)行了染色體觀察計(jì)數(shù)和形態(tài)分析。結(jié)果表明,供試蝴蝶蘭的5個(gè)品種中有3個(gè)四倍體(2n=4x=76),2個(gè)三倍體(2n=3x=57);20個(gè)外引品系中有15個(gè)四倍體,1個(gè)三倍體和4個(gè)非整倍體;14個(gè)自育品系包括10個(gè)四倍體、4個(gè)非整倍體和1個(gè)三倍體。均未見二倍體。不

3、同品種(系)的染色體長(zhǎng)度和形態(tài)相差較大,存在核型多樣性;有22個(gè)品種(系)的染色體組全部由小染色體(長(zhǎng)度2.5 um左右)組成,17個(gè)品種或品系除了含小染色體外還含有大染色體(長(zhǎng)度為5~9.5 um),染色體大小組成與花色有一定相關(guān)性。
　　2.利用酶解法制片,對(duì)分裂中期相對(duì)較多的供試材料的選取、有效的預(yù)處理方法、適宜的酶解時(shí)間和溫度加以探索。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,換盆后14~20d的盆苗嫩根根尖分裂活性最高。剪取長(zhǎng)1cm左右的根尖用0.

4、002mol?L-1的8-羥基喹啉在18℃預(yù)處理4h,卡諾固定液固定2~24h,再用4％纖維素酶和1%果膠酶的混合酶液在25℃下酶解1.5h能獲得高質(zhì)量的制片,染色體分散良好、形態(tài)清晰。將該方法應(yīng)用于小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程的觀察,也得到了減數(shù)分裂各發(fā)育時(shí)期的清晰圖象。
　　3.對(duì)不同倍性蝴蝶蘭(Phalaenopsis)品種(系)的減數(shù)分裂過(guò)程的觀察結(jié)果表明,3個(gè)品種(系)減數(shù)分裂過(guò)程中的染色體行為有明顯差異。4x+2(2n=7

5、8)的‘9912-80’中期二價(jià)體出現(xiàn)的頻率很高,在觀察的23個(gè)小孢子母細(xì)胞中,有5個(gè)細(xì)胞均為二價(jià)體,其余18個(gè)細(xì)胞的二價(jià)體在36~38個(gè)之間。后期I同源染色體分離時(shí),染色體落后的細(xì)胞所占比例達(dá)60%,遲滯染色體的數(shù)量為1~3對(duì),但‘9912-80’最終能形成正常的四分體。三倍體‘滿天紅’(2n=57)的19個(gè)大染色體中期I均以單價(jià)體的形式出現(xiàn),小染色體則配對(duì)成二價(jià)體、四價(jià)體。三倍體‘00036-1’的同源染色體在后期I分離紊亂,隨機(jī)分

6、成幾組。2個(gè)三倍體品種(系)均未見形成正常四分體。
　　4.蝴蝶蘭POD同工酶分析采用成熟根為材料,以0.1 mol·L-1 Tris-HCl(pH8.0)緩沖液提取POD同工酶能獲得數(shù)量多且清晰的酶譜。20個(gè)不同花色的蝴蝶蘭品種(系)顯示了不同的POD同工酶酶譜,聚類結(jié)果表明,差異系數(shù)大于0.48時(shí)可將20不同花色的蝴蝶蘭可以分為3大類,白色品種(系)的蝴蝶蘭與紅色花系和黃色花系具有較近的親緣關(guān)系,而紅色和黃色蝴蝶蘭親緣關(guān)系較遠(yuǎn)