蝴蝶蘭栽培品種葉片培養(yǎng)及八倍體誘導(dǎo)的研究.pdf

1、蝴蝶蘭是一種重要的經(jīng)濟(jì)花卉植物。近年來通過品種選育和工廠化生產(chǎn)技術(shù)的研發(fā)推廣,蝴蝶蘭新品種不斷產(chǎn)生,生產(chǎn)規(guī)模和市場占有率也不斷增大。但生產(chǎn)周期長,組培擴(kuò)繁效率低和可供利用的資源品種較少始終是困擾著蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)長足發(fā)展的障礙。因此迫切需要在組培擴(kuò)繁方法和種質(zhì)創(chuàng)新方面進(jìn)行研究。本研究通過試驗(yàn)9種蝴蝶蘭基因型材料,探討組培相關(guān)的影響因子,包括無菌試管苗的取材部位、不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、不同細(xì)胞分裂素及其與生長素的配合、暗培養(yǎng)時(shí)間、外植體幼嫩程度、有

2、機(jī)添加物以及基因型差異等對誘導(dǎo)不定芽和植株再生的影響。也探索了秋水仙素誘變蝴蝶蘭葉片多倍體不定芽的兩種方法,摸索出誘導(dǎo)八倍體試管苗較適宜的秋水仙素處理濃度和處理時(shí)間,為蝴蝶蘭新品種選育和規(guī)?；a(chǎn)提供有用參考。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1、選取6個(gè)蝴蝶蘭品種(品系),在NDM和1/2MS兩種培養(yǎng)基中誘導(dǎo)葉片分化不定芽。結(jié)果表明,不同品種在同一培養(yǎng)基中不定芽分化率差異極大,在1/2MS中,0377-2誘導(dǎo)率為25.0％,‘滿天紅’、‘

3、夕陽紅’、‘荷黃’等為0。同一品種在不同培養(yǎng)基中芽誘導(dǎo)率也有很大差異,如0377-2在1/2MS培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)率為25.0%,而在NDM培養(yǎng)基中誘導(dǎo)率為0?？傮w上1/2MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽效果好于NDM培養(yǎng)基。
　　2、分別對自育品系0377-2的幼嫩葉片和試管苗根尖(段)進(jìn)行培養(yǎng),在1/2MS+3mg/L TDZ培養(yǎng)基中,葉片不定芽分化率為34.9%,而根段分化原球莖的誘導(dǎo)率僅為13.3%;且葉片外植體分化不定芽時(shí)間短,只需

4、2個(gè)月,根段誘導(dǎo)分化原球莖需要3-4個(gè)月。說明相對而言,根段誘導(dǎo)再分化較葉片誘導(dǎo)再分化要難。在1/2MS+3mg/L TDZ培養(yǎng)基中添加200ml椰汁可能有利于促進(jìn)根段誘導(dǎo)愈傷組織。
　　3、培養(yǎng)基分別添加細(xì)胞分裂素TDZ、6-BA、KT-30、Ad和生長素NAA、IBA及其組合試驗(yàn)的結(jié)果表明,細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)葉片分化不定芽,以TDZ效果最好,其次為6-BA,再次是KT-30和Ad。TDZ、6-BA單獨(dú)使用效果好于與NAA組合使用。

5、單一添加TDZ、6-BA、NAA時(shí),不定芽誘導(dǎo)率分別為100%、70.3%、31.7%;而在TDZ與NAA、6-BA與NAA組合試驗(yàn)中,芽誘導(dǎo)率分別為96.7%、33.3%。當(dāng)TDZ濃度為3mg/L時(shí),品種‘紅天使’不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到100%,平均不定芽數(shù)達(dá)18.2個(gè)。但TDZ對不定芽伸長生長和試管苗生根表現(xiàn)為抑制作用。生長素IBA能夠促進(jìn)試管苗出根,適宜用量為1mg/L—3mg/L。
　　4、研究結(jié)果還表明,對于葉片培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽

6、,小于15d的暗培養(yǎng)時(shí)間為宜;葉長小于1cm的葉片外植體誘導(dǎo)效果最好。
　　5、應(yīng)用秋水仙素浸泡和共培養(yǎng)兩種方法進(jìn)行離體葉片誘導(dǎo)多倍體。秋水仙素浸泡法是將外植體葉片在1/2MS+1mg/LTDZ培養(yǎng)基上誘導(dǎo)分化1個(gè)月后,再用不同濃度秋水仙素溶液浸泡處理帶芽葉片,誘導(dǎo)多倍體產(chǎn)生。秋水仙素共培養(yǎng)法是將外植體葉片在含不同濃度秋水仙素的1/2MS+1mg/LTDZ芽分化培養(yǎng)基上共培養(yǎng)一定時(shí)間后,再轉(zhuǎn)接入不含秋水仙素的相同芽分化培養(yǎng)基中誘導(dǎo)

7、不定芽,繼而獲得加倍的再生植株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:用共培養(yǎng)法在含0.01%的秋水仙素中共培養(yǎng)30d,八倍體誘導(dǎo)率達(dá)33.3%,八倍體苗為7株;浸泡法中以0.1%秋水仙素處理5d的誘變率最高,八倍體誘導(dǎo)率為6.32%,八倍體苗為11株。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn):共培養(yǎng)法優(yōu)點(diǎn)在于八倍體誘導(dǎo)率高,缺點(diǎn)是對外植體葉片毒害大,最終成苗數(shù)少;浸泡法優(yōu)點(diǎn)在于對外植體帶芽葉片毒害小,最后成苗數(shù)高,而八倍體誘導(dǎo)率低。
　　四倍體品種‘紅天使’經(jīng)秋水仙素誘變處