谷氨酸棒狀桿菌乙酸代謝調(diào)控的研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文谷氨酸棒狀桿菌乙酸代謝調(diào)控的研究姓名：阮紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)工程指導(dǎo)教師：朱自強(qiáng)李德葆2001.1.1失菌株相反的效應(yīng)。以上結(jié)果說(shuō)明off42可能編碼了一個(gè)能被葡萄糖激活的阻遏蛋白分子或共阻遏分子，當(dāng)該阻遏蛋白分子作用于pta—ack操縱了后，將抑制PTA和AK酶的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)；off42顯示參與了PIA利AK的調(diào)控，而并刁i參與劉IcL刺Ms的調(diào)控。、構(gòu)建用于篩選乙酸代謝調(diào)控突變子的新型檢測(cè)系統(tǒng)。在原有

2、的檢測(cè)載體含有報(bào)告基因——氯霉素轉(zhuǎn)乙酰酶基因的基礎(chǔ)上發(fā)展了兩種新型檢測(cè)載體pROH7和pROHO，它們含有與乙酸代謝調(diào)控有關(guān)的啟動(dòng)子區(qū)域，含有D一半乳糖苷酶基因LacY和四環(huán)素抗性基因。在野生型菌株中引入該兩種新的檢測(cè)載體并建立了兩套乙酸代謝途徑中調(diào)控狀況的檢測(cè)系統(tǒng)，它可直接通過(guò)藍(lán)白斑表型進(jìn)行乙酸代謝調(diào)控轉(zhuǎn)座子突變予的檢測(cè)和篩選。在含葡萄糖的基質(zhì)上篩選藍(lán)斑為酶調(diào)控阻遏子的突變株；在含乙酸的基質(zhì)上篩選白斑為酶調(diào)控激活子的突變株。最后通過(guò)四

3、種乙酸調(diào)控的關(guān)鍵酶AK、PTA、ICL和Ms的酶活測(cè)定，進(jìn)一步鑒定所檢測(cè)的轉(zhuǎn)座了插入突變株的調(diào)控功能。對(duì)碳代謝調(diào)控蛋白A基因(ccpA)突變子的初步鑒定。兩個(gè)與ccpA基因具有高度同源序列的ccpA68和ccpA82基因通過(guò)插入突變獲得了相應(yīng)的基因突變株。對(duì)該兩個(gè)突變株的四種乙酸代謝關(guān)鍵酶PTA、AK、ICL和Ms的酶活分析表明，兩個(gè)突變株在葡萄糖或／和乙酸為基質(zhì)的培養(yǎng)基上表現(xiàn)出原始菌株的相似酶活特征。該結(jié)果初步表明碳代謝調(diào)控蛋白A(C