急性壞死性胰腺炎胰腺組織中褪黑素受體表達及褪黑素干預(yù)作用.pdf

1、目的：探討急性壞死性胰腺炎(acutenecrotizingpancreatitis，ANP)胰腺組織中褪黑素受體(melatoninreceptor1，MR1)表達及褪黑素(melatonin，MT)干預(yù)作用。
　　 方法：
　　 1．健康雄性SD大鼠54只，質(zhì)量200-250g，實驗前禁食12小時，自由進水。將大鼠隨機分成3組：假手術(shù)組(shamoperation，SO)，急性壞死性胰腺炎組(acutenecroti

2、zingpancreatitis，ANP)，褪黑素干預(yù)SAP組(MTpretreated，MT)。每組各18只。
　　 2．誘導(dǎo)ANP:腹腔注射5％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉動物后剖腹，采用逆行胰膽管注射法。SO組翻動十二指腸、胰腺組織數(shù)次，ANP組勻速注入4％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)，MT組在誘導(dǎo)ANP前30min經(jīng)腹腔注射4％MT(50mg/kg)，常規(guī)關(guān)腹，動物造模后于背部皮下分點注射2.0mL無菌生理

3、鹽水，補充水分。
　　 3．各組大鼠分別于術(shù)后第4h、8h、12h（各組各時間點6只）3個時點由下腔靜脈取血5-8ml，低溫離心（3000r/min、10分鐘、4℃），留取上層血清于-20℃冰箱保存待測淀粉酶。迅速取出胰腺組織：一部分置于去RNA酶凍存管中，置-80℃冰箱保存，待行實時定量PCR;一部分經(jīng)4％多聚甲醛固定待行病理檢查和免疫組化；剩余組織制備組織勻漿，測定氧化指標。心臟穿刺取血處死大鼠。
　　 4．胰腺組織

4、常規(guī)行病理學(xué)(HE染色法)檢查及評分。
　　 5．檢測血清淀粉酶（AMY），測定胰腺組織中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量，免疫組織化學(xué)SABC法定性檢測胰腺組織中MR1蛋白的表達，實時定量(Rea1-Time)PCR檢測胰腺組織中MR1mRNA的表達水平。
　　 6．統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，所有數(shù)據(jù)以x±s表示，進行正態(tài)性檢驗和方差齊性分析，采用t檢

5、驗、完全隨機設(shè)計單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：成功建立大鼠ANP模型。
　　 1．胰腺組織病理同SO組比較，ANP組各時點胰腺組織均有不同程度的病理損害，且隨時間延長病變呈進行性加重，MT組胰腺病理損害較相應(yīng)時點ANP組顯著減輕（P＜0.05）。
　　 2．血清淀粉酶同SO組比較，ANP組和MT組血清淀粉酶增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；MT組血清淀粉酶較相應(yīng)時點ANP組下

6、降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3．胰腺組織中MDA、TNF-α、SOD的水平MDA、TNF-α水平在ANP組較SO組明顯增高(P＜0.05或P＜0.01)，而MT組較相應(yīng)時間點ANP組顯著降低(P＜0.05)。SOD水平在ANP組各時點較SO組顯著降低(P＜0.01)，而MT組較ANP組顯著升高(P＜0.05)。
　　 4．胰腺組織中MR1蛋白及MR1mRNA表達與SO組相比，MR1蛋白及MR1mRNA表