輕癥或重癥手足口病患兒HEV71分離鑒定及其VP1基因型分析.pdf

1、人腸道病毒71型(human enterovirus71，HEV71)為腸道病毒A組單股正鏈RNA病毒，是手足口病(hand-foot-and-mouth disease，HFMD)主要病原體。HEV71殼粒由VP1～VP4四種病毒蛋白組成，其中VP1具有細(xì)胞受體結(jié)合位點(diǎn)、中和抗體表位及抗病毒藥物結(jié)合位點(diǎn)，故VP1在病毒感染、抗病毒免疫應(yīng)答及藥物治療效果等方面有重要作用。若VP1功能相關(guān)重要位點(diǎn)發(fā)生突變，可使HEV71毒力和耐藥性發(fā)生改

2、變，從而對(duì)HFMD患者病情嚴(yán)重程度產(chǎn)生較大影響。HEV71的VP1序列中有一個(gè)微小RNA病毒衣殼蛋白樣(picornavirus capsid protein domain-like，rhv_like)功能結(jié)構(gòu)域(domain)，該結(jié)構(gòu)域含有9個(gè)藥物結(jié)合位點(diǎn)。根據(jù)VP1序列差異， HEV71可分為A、B0～5和C1～5基因型，不同地區(qū)流行的主要HEV71-VP1基因型可有差異。因此，了解不同地區(qū)優(yōu)勢(shì)流行的HEV71VP1基因型及其rhv

3、_like結(jié)構(gòu)域中藥物結(jié)合位點(diǎn)突變對(duì)于HFMD防控及治療均有較大意義。
　　目的:從不同病情HFMD患兒中分離鑒定HEV71并分析其VP1基因型及rhv_like結(jié)構(gòu)域中藥物結(jié)合位點(diǎn)突變情況。
　　方法:從2014年浙江省紹興地區(qū)4例輕癥和4例重癥HFMD患兒標(biāo)本中分離HEV71并用RT-PCR進(jìn)行鑒定。采用RT-PCR擴(kuò)增病毒分離株全長(zhǎng)VP1基因并測(cè)序。采用專(zhuān)業(yè)生物信息學(xué)軟件，對(duì)HEV71分離株進(jìn)行VP1基因分型、確定VP

4、1基因rhv_like結(jié)構(gòu)域中藥物結(jié)合位點(diǎn)突變情況并構(gòu)建HEV71分離株系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。
　　結(jié)果:HEV和HEV71RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，8例HFMD患兒標(biāo)本中分離的病毒均為HEV71。與GenBank中HEV71參考標(biāo)準(zhǔn)株VP1基因各基因型序列比較，8例HFMD患兒標(biāo)本中分離的HEV71株VP1基因核苷酸及氨基酸序列均與C4a基因型相似性最高，分別為97.2％～98.8％和99.3％～99.7％。2株分離自2例重癥HFMD患兒