川烏配伍川貝母的毒性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過比較川烏單行及川烏與川貝母配伍水浸劑對(duì)小鼠的急性毒性和對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性，確定二者配伍對(duì)川烏毒性的影響，探討中藥十八反中“烏頭反貝母”藥對(duì)配伍與毒性的關(guān)系，為該藥對(duì)臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、藥液制備
　　 取粉碎成米粒大小的川烏50g，精密稱定，加150mlPH為5的HCl溶液，超聲混合10min，浸泡12h，過濾，藥渣再加150mlHCl溶液，浸泡6h，過濾，絞渣取汁，合并兩次濾液

2、，將藥液4000轉(zhuǎn)/分離心，取澄清液，冷凍濃縮，加適量NaHCO3溶液調(diào)pH=7.5，加蒸餾水至50ml(1g/m1)溶液備用。另取川烏與川貝母各50g，按上述方法制備川烏配伍川貝母水浸劑。
　　 2、急性毒性試驗(yàn)
　　 以“低比稀釋法”按1:0.7比例配制一系列藥液。昆明種小鼠140只，隨機(jī)分為川烏單行組(RA)和川烏配伍川貝母組(RA&BFC)，每組70只。每組再隨機(jī)分為(以川烏劑量計(jì)算)28g/kg、19.6g/k

3、g、13.7g/kg、9.6g/kg、6.7g/kg、4.7g/kg組及空白對(duì)照組，ig給藥，給藥容積40ml/kg，空白對(duì)照組ig等容積蒸餾水。給藥后觀察14d。記錄小鼠中毒潛伏期、癥狀及死亡時(shí)間、恢復(fù)期及死亡數(shù)量。用綜合計(jì)算法公式計(jì)算兩種水浸劑的LD50。
　　 3、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)
　　 Wistar大鼠100只，隨機(jī)分為RA組(0.3g/kg)，烏貝配伍1g/kg(RA&BFC1)、0.3g/kg(RA&BFC2)、

4、0.1g/kg(RA&BFC3)組及空白對(duì)照組，每組20只，雌雄各半。給藥容積5ml/kg體重，對(duì)照組給予等容積蒸餾水，ig給藥，每天1次，連續(xù)給藥28d。各組大鼠自由飲食，每周稱體重1次。給藥期間觀察大鼠體征、行為活動(dòng)。末次給藥后24h，各試驗(yàn)組取2/3大鼠，以0.04％水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)血液常規(guī)及心(CK、LDH)、肝(AST、ALT)、腎(BUN、Cr)功能等血清生化指標(biāo)。取心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上

5、腺、子宮、卵巢、睪丸、前列腺等器官，用生理鹽水沖洗濾紙吸干后，稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)。各組織均進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè)。剩余1/3大鼠停藥15d后，同樣處理。
　　 結(jié)果：
　　 1、小鼠ig給藥急性毒性
　　 中毒表現(xiàn)為一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)癥狀，首先出現(xiàn)惡心、嘔吐、咳嗽、后肢無(wú)力，行走困難等，動(dòng)物臨死前多出現(xiàn)數(shù)次跳躍，煩躁不安，繼之肢體抽搐、震顫、瞳孔散大、遺尿，呼吸困難，最后死于呼吸衰竭

6、。RA組動(dòng)物中毒反應(yīng)的潛伏期為2.6-9.3min；死亡時(shí)間為7.7-20.0min。RA&BFC組動(dòng)物中毒反應(yīng)的潛伏期為2.2-5.2，死亡時(shí)間為8.67-13.7min。在同等給藥劑量情況下，RA&BFC組較RA組中毒潛伏期縮短、中毒癥狀嚴(yán)重、死亡率增高。
　　 川烏單行LD50為9.26g/kg，95％可信限為7.70g/kg-11.15g/kg。川烏配伍川貝母LD50為7.75g/kg，95％可信限為6.15g/kg-9

7、.35g/kg。川烏配伍川貝母水浸劑LD50較川烏單行LD50降低16.3％。
　　 2、大鼠ig給藥長(zhǎng)期毒性
　　 2.1一般體征、癥狀及體重增長(zhǎng)率
　　 實(shí)驗(yàn)期間，各組動(dòng)物無(wú)死亡，一般狀況良好。RA&BFC1組、RA&BFC2組、RA組部分動(dòng)物，給藥后5-10min出現(xiàn)不同程度的惡心、嘔吐、咳嗽等中毒癥狀。毒性反應(yīng)程度與給藥劑量呈正相關(guān)，毒性反應(yīng)在給藥后1-5h內(nèi)逐漸消失。低劑量組、對(duì)照組動(dòng)物無(wú)明顯毒性反應(yīng)。

8、給藥組動(dòng)物體重增長(zhǎng)率與空白對(duì)照組比較差異無(wú)顯著意義(P>0.05)。
　　 2.2臟器指數(shù)
　　 RA組及RA&BFC各劑量組雌性大鼠腎臟系數(shù)高于對(duì)照組(P<0.01)；脾臟系數(shù)低于對(duì)照組(P<0.01)。RA&BFC1組雌雄性大鼠肝臟系數(shù)高于其余4個(gè)組，差異有顯著性(P<0.01)。RA&BFC1組雄性大鼠脾臟系數(shù)低于其余4個(gè)組，差異有顯著性(P<0.01)；腎上腺系數(shù)高于其余4個(gè)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

9、停藥15d，RA&BFC1組雌雄性大鼠肝臟系數(shù)高于其余4個(gè)組，雌性大鼠的差異有顯著性(P<0.01)，雄性大鼠的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.3血液常規(guī)
　　 RA&BFC1組的白細(xì)胞(WBC)數(shù)、淋巴細(xì)胞(L)數(shù)高于其余4各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。停藥15d，川烏組及烏貝配伍各劑量組大鼠血液學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.4血液生化學(xué)指標(biāo)

10、　　 RA組雌雄性大鼠血清AST、ALT、BUN和雌性大鼠LDH水平高于對(duì)照組(P<0.05－0.01)。
　　 RA&BFC1組雌性大鼠血清各項(xiàng)指標(biāo)均高于對(duì)照組(P<0.01)；RA&BFC2組血清AST、ALT、BUN、LDH水平高于對(duì)照組(P<0.01)；RA&BFC3組AST、BUN、LDH水平高于對(duì)照組(P<0.05－0.01)。RA&BFC各劑量組雄性大鼠血清AST、ALT、BUN水平高于對(duì)照組(P<0.05-0.

11、01)。
　　 RA&BFC1組雌性大鼠AST、ALT、Cr、CK水平和雄性大鼠ALT、BUN水平高于川烏組(P<0.05－0.01)。RA&BFC3組雌性大鼠AST、ALT、LDH和雄性大鼠ALT、BUN低于川烏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05－0.01。烏RA&BFC2組雌雄大鼠各項(xiàng)血液生化指標(biāo)與RA組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 停藥15d，RA&BFC1組大鼠血清AST、ALT、CK水平和雄性大鼠

12、ALT水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，高于其他3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 2.5病理組織學(xué)
　　 肉眼觀察，高劑量組大鼠肝臟大多數(shù)表現(xiàn)為體積增大，少數(shù)有肝臟顏色變淺、變黃。未見其它異常。RA&BFC1組大鼠心、肝、腎等組織細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞壞死、水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。RA組及RA&BFC2組、RA&BFC3組大鼠主要臟器組織損傷較輕或無(wú)明顯損傷。停藥15d給藥組大鼠各臟器組織無(wú)明顯損傷。