高有效組分川貝母的組織培養(yǎng)與質(zhì)量研究.pdf

1、川貝母(Fritillaria Cirrhosa D.Don)為名貴川產(chǎn)道地藥材，主要分布在海拔2800～4700m的高山灌叢和草地中，大多位于我國西南部橫斷山區(qū)。川貝母用于治療咳嗽、祛痰、平喘效果顯著，其含有的貝母素甲、貝母素乙、西貝母堿等貝母生物堿。然而，在自然條件下川貝母5年才能收獲一次，加之近年來人們大肆采挖，導(dǎo)致野生川貝母資源匱乏，且含有的生物堿含量較低。為解決這一問題，本實(shí)驗(yàn)采用組培生物技術(shù)，建立具有高有效組分含量的川貝母快

2、速繁殖體系。此外，為了全面提取川貝母的有效成分，通過正交設(shè)計(jì)對(duì)組培川貝母有效成分的提取工藝進(jìn)行了研究。同時(shí)為了更好地控制組培川貝母的質(zhì)量，本研究嚴(yán)格按照2010版《中國藥典》對(duì)組培川貝母進(jìn)行了質(zhì)量研究。結(jié)果如下:
　　1.以川貝母鱗片葉為外植體，研究了不同激素對(duì)川貝母愈傷組織的形成、分化成鱗莖、抽苗以及生根的影響。結(jié)果表明，愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mg/L+2，4-D0.5mg/L，經(jīng)45d培養(yǎng)后誘導(dǎo)率為83

3、.33％;分化成鱗莖的最佳培養(yǎng)基為MS+KT2.0mg/L+NAA0.3mg/L，經(jīng)45 d培養(yǎng)后誘導(dǎo)率為82.77％;抽苗的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.3mg/L，經(jīng)45d培養(yǎng)后抽苗率為85.39％;經(jīng)60d培養(yǎng)后生根最佳培養(yǎng)基為MS+NAA0.3mg/L，生根率為83.20％。
　　2.研究了秋水仙素濃度、浸泡時(shí)間、二甲基亞砜體積分?jǐn)?shù)、處理溫度對(duì)川貝母多倍體誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明川貝母多倍體誘導(dǎo)條件的最優(yōu)

4、組合是秋水仙素濃度為900mg/L、浸泡時(shí)間為48h、二甲基亞砜體積分?jǐn)?shù)為4％、處理溫度為20℃，在此條件下培養(yǎng)30d，其誘導(dǎo)率可達(dá)94.3％。對(duì)野生川貝母、組培二倍體川貝母、經(jīng)染色體誘導(dǎo)后的多倍體川貝進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果顯示三者之間總生物堿含量分別為0.237％、0.249％和0.657％，研究表明經(jīng)組培后的川貝母不論是二倍還是多倍體均比野生川貝母含量高，且多倍體是野生川貝母的2.8倍左右。
　　3.采用正交實(shí)驗(yàn)考察了乙醇濃度、

5、加醇量、提取時(shí)間及提取次數(shù)對(duì)組培川貝母有效成分提取的影響。結(jié)果表明四種因素之間影響效果為乙醇濃度＞加醇倍數(shù)＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)，當(dāng)提取工藝為用6倍量85％乙醇，提取2次，每次1.5h時(shí)得到的有效成分最多。通過總灰分、酸不溶性灰分、浸出物、生物堿含量、薄層色譜等檢測(cè)對(duì)組培川貝母進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，結(jié)果表明:組培川貝母的總灰分不應(yīng)超過2％，酸不溶性灰分不應(yīng)超過1％，浸出物不得少于20％，總生物堿含量應(yīng)在0.2％～0.3％之間。
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