川楝子毒性及配伍減毒的代謝組學(xué)研究.pdf

1、川楝子(Melia toosendan Sieb)為楝科楝屬植物川楝的干燥成熟果實,具有疏肝理氣,行氣止痛之功效,常用于胸脅、脘腹脹痛、疝痛、蟲積腹痛等癥。廣泛應(yīng)用于臨床疾病的治療。川楝子主要成分川楝素是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一抗肉毒毒素的天然化合物,且對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制生長、誘導(dǎo)凋亡作用。有研究表明,大鼠或小鼠口服大劑量的川楝子后可致肝損傷,然而,現(xiàn)在僅在細(xì)胞水平上的肝細(xì)胞損傷機制進行研究。關(guān)于如何在服用川楝子的過程中動態(tài)監(jiān)測如對肝腎毒性的

2、變化,解釋川楝子在體內(nèi)毒性代謝機制方面還未有研究報道,影響其在臨床上的應(yīng)用。本研究利用基于核磁共振的代謝組學(xué)方法對川楝子水提物、不同極性提取物、以及與白芍配伍的毒性進行了研究,探討了其毒性機制,并結(jié)合中醫(yī)配伍減毒理論,對白芍與川楝子配伍應(yīng)用可減毒的代謝機制進行了代謝組學(xué)研究。
　　1.在本研究中,利用基于NMR的代謝組學(xué)方法對機體尿液、血清進行1H-NMR測定,為了解決水峰信號干擾其他小分子物質(zhì)信號的問題,在試驗中采用MPFGE脈

3、沖序列抑制水峰。對空白大鼠尿液1H-NMR譜峰指認(rèn)中,發(fā)現(xiàn)TCA中間產(chǎn)物如檸檬酸,2-OG,琥珀酸等信號明顯,而在給藥后,氫譜譜峰信號發(fā)生變化,將不同組別1H-NMR積分?jǐn)?shù)據(jù)進行主成分分析找出引起組間差異的一系列小分子代謝物,從變化的代謝物組群上對生命現(xiàn)象作出解釋。
　　2.單次口服給予SD大鼠川楝子水提物(200g/kg),對大鼠血清生化指標(biāo)進行檢測、統(tǒng)計分析,觀察肝臟、腎臟組織形態(tài)變化,利用1H-NMR連續(xù)監(jiān)測尿樣中代謝物的變

4、化,并對譜圖數(shù)據(jù)進行主成分分析。結(jié)果顯示:給藥24h后以主成分分析方法從一組候選代謝物中找出與川楝子造成大鼠肝、腎毒性相關(guān)的生物標(biāo)記物,如檸檬酸、琥珀酸、2-OG和牛磺酸水平下降,肌酐、TMAO、乳酸、馬尿酸、甜菜堿、甘氨酸水平升高,結(jié)合病理生化指標(biāo),以及文獻(xiàn)中的研究結(jié)果,從代謝物的角度來推測川楝子的毒性作用過程的機制。
　　3.該部分利用代謝組學(xué)從代謝物水平對川楝子毒性的時效、量效關(guān)系進行了研究。發(fā)現(xiàn)隨著給藥劑量加大,給藥時間延

5、長,機體在得分軌跡圖上代謝軌跡偏離對照組越多。高劑量組在給藥過程中,尿液中代謝物如檸檬酸、琥珀酸、2-OG、牛磺酸、甜菜堿、甘氨酸水平下降,乳酸、TMAO、肌酸/肌酐水平升高,說明川楝子毒性效應(yīng)可能涉及到肝、腎。高劑量組在給藥期間轉(zhuǎn)氨酶升高,肝細(xì)胞出現(xiàn)變形、壞死等病變,腎小管擴張、上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落;中劑量組轉(zhuǎn)氨酶無明顯變化,病理形態(tài)上可見肝竇擴張,該細(xì)胞散在輕微變性,腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死等。低劑量組在生化指標(biāo)未見異常,肝、腎

6、組織未見病變?？梢姶ㄩ佣拘跃哂幸欢ǖ臅r效量效關(guān)系。
　　4.為進一步確定川楝子毒性作用的物質(zhì)基礎(chǔ),利用川楝子不同極性溶劑提取物(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇)作用于機體來進行研究,從血清1H-NMR譜峰數(shù)據(jù)分析得到的PCA得分圖上可看出四組能完全分開,石油醚組離對照組最遠(yuǎn),乙酸乙酯組最近。乙酸乙酯提取物組轉(zhuǎn)氨酶升高,肝細(xì)胞廣泛變性,腎小管明顯擴張,上皮細(xì)胞變性,損傷甚至脫落。石油醚提取物組和正丁醇提取物組生化指標(biāo)和病理形態(tài)未見異常。

7、說明川楝子乙酸乙酯提取物對機體具有損傷作用。
　　5.從白芍配伍川楝子的代謝組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn),與川楝子組相比,配伍組尿液中代謝物變化相對緩和,如甲酸、葡萄糖、檸檬酸、琥珀酸、2-OG、肌酸/肌酐、乳酸、谷氨酰胺、TMAO等。從生化指標(biāo)上看,配伍組轉(zhuǎn)氨酶升高但與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義,少量肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞變性;川楝子組轉(zhuǎn)氨酶明顯升高,肝細(xì)胞變性,腎小管上皮細(xì)胞變性壞死。說明白芍具有一定的對抗川楝子毒性的作用。
　　本實驗應(yīng)