川楝子毒性及配伍減毒的代謝組學(xué)研究.pdf

1、川楝子(Melia toosendan Sieb)為楝科楝屬植物川楝的干燥成熟果實(shí),具有疏肝理氣,行氣止痛之功效,常用于胸脅、脘腹脹痛、疝痛、蟲(chóng)積腹痛等癥。廣泛應(yīng)用于臨床疾病的治療。川楝子主要成分川楝素是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一抗肉毒毒素的天然化合物,且對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抑制生長(zhǎng)、誘導(dǎo)凋亡作用。有研究表明,大鼠或小鼠口服大劑量的川楝子后可致肝損傷,然而,現(xiàn)在僅在細(xì)胞水平上的肝細(xì)胞損傷機(jī)制進(jìn)行研究。關(guān)于如何在服用川楝子的過(guò)程中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)如對(duì)肝腎毒性的

2、變化,解釋川楝子在體內(nèi)毒性代謝機(jī)制方面還未有研究報(bào)道,影響其在臨床上的應(yīng)用。本研究利用基于核磁共振的代謝組學(xué)方法對(duì)川楝子水提物、不同極性提取物、以及與白芍配伍的毒性進(jìn)行了研究,探討了其毒性機(jī)制,并結(jié)合中醫(yī)配伍減毒理論,對(duì)白芍與川楝子配伍應(yīng)用可減毒的代謝機(jī)制進(jìn)行了代謝組學(xué)研究。
　　1.在本研究中,利用基于NMR的代謝組學(xué)方法對(duì)機(jī)體尿液、血清進(jìn)行1H-NMR測(cè)定,為了解決水峰信號(hào)干擾其他小分子物質(zhì)信號(hào)的問(wèn)題,在試驗(yàn)中采用MPFGE脈

3、沖序列抑制水峰。對(duì)空白大鼠尿液1H-NMR譜峰指認(rèn)中,發(fā)現(xiàn)TCA中間產(chǎn)物如檸檬酸,2-OG,琥珀酸等信號(hào)明顯,而在給藥后,氫譜譜峰信號(hào)發(fā)生變化,將不同組別1H-NMR積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析找出引起組間差異的一系列小分子代謝物,從變化的代謝物組群上對(duì)生命現(xiàn)象作出解釋。
　　2.單次口服給予SD大鼠川楝子水提物(200g/kg),對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)、統(tǒng)計(jì)分析,觀察肝臟、腎臟組織形態(tài)變化,利用1H-NMR連續(xù)監(jiān)測(cè)尿樣中代謝物的變

4、化,并對(duì)譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析。結(jié)果顯示:給藥24h后以主成分分析方法從一組候選代謝物中找出與川楝子造成大鼠肝、腎毒性相關(guān)的生物標(biāo)記物,如檸檬酸、琥珀酸、2-OG和牛磺酸水平下降,肌酐、TMAO、乳酸、馬尿酸、甜菜堿、甘氨酸水平升高,結(jié)合病理生化指標(biāo),以及文獻(xiàn)中的研究結(jié)果,從代謝物的角度來(lái)推測(cè)川楝子的毒性作用過(guò)程的機(jī)制。
　　3.該部分利用代謝組學(xué)從代謝物水平對(duì)川楝子毒性的時(shí)效、量效關(guān)系進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)隨著給藥劑量加大,給藥時(shí)間延

5、長(zhǎng),機(jī)體在得分軌跡圖上代謝軌跡偏離對(duì)照組越多。高劑量組在給藥過(guò)程中,尿液中代謝物如檸檬酸、琥珀酸、2-OG、?；撬帷⑻鸩藟A、甘氨酸水平下降,乳酸、TMAO、肌酸/肌酐水平升高,說(shuō)明川楝子毒性效應(yīng)可能涉及到肝、腎。高劑量組在給藥期間轉(zhuǎn)氨酶升高,肝細(xì)胞出現(xiàn)變形、壞死等病變,腎小管擴(kuò)張、上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落;中劑量組轉(zhuǎn)氨酶無(wú)明顯變化,病理形態(tài)上可見(jiàn)肝竇擴(kuò)張,該細(xì)胞散在輕微變性,腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死等。低劑量組在生化指標(biāo)未見(jiàn)異常,肝、腎

6、組織未見(jiàn)病變?？梢?jiàn)川楝子毒性具有一定的時(shí)效量效關(guān)系。
　　4.為進(jìn)一步確定川楝子毒性作用的物質(zhì)基礎(chǔ),利用川楝子不同極性溶劑提取物(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇)作用于機(jī)體來(lái)進(jìn)行研究,從血清1H-NMR譜峰數(shù)據(jù)分析得到的PCA得分圖上可看出四組能完全分開(kāi),石油醚組離對(duì)照組最遠(yuǎn),乙酸乙酯組最近。乙酸乙酯提取物組轉(zhuǎn)氨酶升高,肝細(xì)胞廣泛變性,腎小管明顯擴(kuò)張,上皮細(xì)胞變性,損傷甚至脫落。石油醚提取物組和正丁醇提取物組生化指標(biāo)和病理形態(tài)未見(jiàn)異常。

7、說(shuō)明川楝子乙酸乙酯提取物對(duì)機(jī)體具有損傷作用。
　　5.從白芍配伍川楝子的代謝組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn),與川楝子組相比,配伍組尿液中代謝物變化相對(duì)緩和,如甲酸、葡萄糖、檸檬酸、琥珀酸、2-OG、肌酸/肌酐、乳酸、谷氨酰胺、TMAO等。從生化指標(biāo)上看,配伍組轉(zhuǎn)氨酶升高但與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,少量肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞變性;川楝子組轉(zhuǎn)氨酶明顯升高,肝細(xì)胞變性,腎小管上皮細(xì)胞變性壞死。說(shuō)明白芍具有一定的對(duì)抗川楝子毒性的作用。
　　本實(shí)驗(yàn)應(yīng)