黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素基因多態(tài)性與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、本研究對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素基因全長(zhǎng)進(jìn)行克隆測(cè)序，分析GH在組織中的差異性表達(dá)，對(duì)GH基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）和微衛(wèi)星（SSR）多態(tài)性與主要的生長(zhǎng)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，并獲得調(diào)控經(jīng)濟(jì)性狀的優(yōu)勢(shì)基因位點(diǎn)。
　　（1）GH基因的分子特征
　　根據(jù)親緣關(guān)系較近物種的GH基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，通過(guò)克隆測(cè)序拼接后獲得DNA全長(zhǎng)序列，共3117bp，包括5′UTR165bp，3′UTR485bp，由5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子組成，外顯子大小分

2、別為10bp、140bp、117bp、132bp、204bp，內(nèi)含子大小分別為302bp、85bp、642bp、835bp。
　?。?）GH基因的差異性表達(dá)
　　通過(guò)半熒光定量和實(shí)時(shí)熒光定量?jī)煞N方法研究黃顙魚(yú)GH基因mRNA的差異性表達(dá)。結(jié)果顯示：GH基因只在垂體中特異表達(dá)，而在肌肉、脾臟、脂肪、腎臟、胃、盲腸、心臟、頭腎、精巢、腸、鰓、肝臟、魚(yú)皮和腦這14個(gè)組織中均未檢測(cè)到表達(dá)。
　?。?）SNP與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性<

3、br>　　以GH基因作為影響黃顙魚(yú)主要生長(zhǎng)性狀的候選基因，樣本數(shù)為160，通過(guò)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法篩選SNP位點(diǎn)，篩選區(qū)域?yàn)槠瓮怙@子4到片段外顯子5和3′UTR區(qū)域，共檢測(cè)到5個(gè)SNP位點(diǎn)，內(nèi)含子4區(qū)域檢測(cè)到4個(gè)，3′UTR發(fā)現(xiàn)1個(gè)。并對(duì)SNP位點(diǎn)基因型和主要生長(zhǎng)性狀（體重、全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、體厚、頭長(zhǎng)、尾柄長(zhǎng)、尾柄高）進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示：存在于內(nèi)含子4的位點(diǎn)1674G>A和位點(diǎn)2154T>G與生長(zhǎng)性狀無(wú)顯著關(guān)聯(lián)；位點(diǎn)2100A>

4、G與性狀體厚有極顯著關(guān)聯(lián)（P＜0.01），GG為優(yōu)勢(shì)基因型；位點(diǎn)2285T>C與尾柄長(zhǎng)有顯著關(guān)聯(lián)（P＜0.05），CC為優(yōu)勢(shì)基因型；存在于3′UTR的位點(diǎn)2822A>G與全長(zhǎng)、尾柄高有顯著關(guān)聯(lián)（P＜0.05），與體長(zhǎng)、尾柄長(zhǎng)有極顯著關(guān)聯(lián)（P＜0.01），GG為優(yōu)勢(shì)基因型。
　　（4）SSR與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性
　　通過(guò)SSRHunter軟件在黃顙魚(yú)GH基因上查找到4個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，將其在96-毛細(xì)管ABI3730xl上進(jìn)行檢測(cè)，