黃鱔促性腺激素釋放激素(GnRH)cDNA分子部分序列的研究.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文黃鱔促性腺激素釋放激素(GnRH)cDNA分子部分序列的研究姓名：張春霖申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：魯成;李英文20000601瓊脂糖凝膠電泳分離并回收純化的P C R 片段。，轉(zhuǎn)化進入T S S 致敏的大腸桿菌X L —B I u e 菌株中。a ．互補篩選重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的細菌，從中挑取了3 6 個白色菌落進行一步法檢測，其中有兩個表現(xiàn)出滯后。滯后菌落經(jīng)H i n d l I I 和E

2、e o RI 雙酶切，均得到一條同樣大小的片段。而蘭色菌落的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切卻無此帶。從酶切結果看出，目的片段已經(jīng)克隆進入質(zhì)粒載體中，并已在一些茵落中得到擴增。4 克隆片段的序列測定及分析分離并用P E G ( M W = 8 0 0 0 ) 純化的質(zhì)粒在大連寶生物工程公司進行序列測定。得到所克隆的片段為2 2 6 b p ，所測得的序列與虹鱒G n R H ，馬蘇大麻哈魚G n R H ，海鱸G n R H l ，2 ，金魚G n R H

3、 及蘭背鯛G n R H 的c D N A 進行比較分別有4 7 ．9 5 ％，5 2 ．2 ‰4 5 ．7 ％，5 0 ．4 1 ％，5 0 ．9 6 ％和5 0 ％的相似性。顯示了編碼G n R I - I 的基因在不同種類間的獨立性。5 克隆片段的氨基酸釋讀及分析對所克隆片段的核苷酸序列進行氨基酸釋讀，并與其它硬骨魚類G n R H 前體的氨基酸序列進行比較分析。發(fā)現(xiàn)該片段編碼黃鱔c G n R H ．I I 前體的羧基端的5 1

4、 個氨基酸，其中包括：G n R I - I 十肽中5 ～1 0 位氨基酸、三肽i J n q - 位點和相關肽序列( 4 2 個氨基酸殘基) 。這一多肽片段的氨基酸順序為( 下畫線部分為三肽加工位點) ：H G W Y P G 壘基塞E G N V V I L I N A P V E I I 可D K W I Q w K K R N K M Y F CN V V C V I T V V T C這一多肽鏈與其它硬骨魚類的G n R H