“黃龍四苓湯”中大黃、龍膽提取物制備方法研究.pdf

1、黃龍四苓湯為臨床上治療高血壓及其并發(fā)癥的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)方，由大黃、龍膽、豬苓、茯苓、澤瀉、白術(shù)等六味中藥配伍而成。本論文的主要目的是對(duì)方中君藥大黃、臣藥龍膽兩味藥材的有效部位進(jìn)行提取、純化工藝的優(yōu)選，以及對(duì)二者配伍后的各有效成分的溶出量的變化進(jìn)行研究。主要研究?jī)?nèi)容概述如下：
　　1.大黃提取純化工藝的研究：以高效液相色譜法測(cè)定大黃中五種蒽醌類成分（蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚）的含量為指標(biāo)，通過(guò)對(duì)4種提取方法（冷浸法、

2、溫浸法、超聲法、加熱回流提取法）的考察，確定最佳提取方法為加熱回流提取法；采用L9（34）正交試驗(yàn)，以高效液相色譜法測(cè)定大黃中五種蒽醌類成分的含量為指標(biāo)，對(duì)大黃蒽醌類成分提取量的主要影響因素提取次數(shù)、提取時(shí)間、乙醇濃度及用量進(jìn)行考察，確定最佳提取工藝為：70％乙醇12倍量，提取3次，每次1小時(shí)；采用大孔吸附樹脂柱層析法純化大黃粗提物，以大黃五種蒽醌類成分為指標(biāo)，考察9種類型大孔吸附樹脂的吸附與解吸附性能，篩選確定純化大黃提取物有效部位的

3、最佳樹脂型號(hào)為D101型，進(jìn)一步采用單因素試驗(yàn)結(jié)合L9（34）正交試驗(yàn)方法，對(duì)該樹脂的吸附特性和柱層析工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，得出最佳純化工藝條件為：柱徑比為3:1，上樣藥液質(zhì)量濃度（生藥材）0.1g/mL，以4BV/h流速上樣54mL,用7BV量60%乙醇進(jìn)行解吸附，以2BV/h的流速洗脫，大黃粗提物經(jīng)D101型大孔吸附樹脂純化后，總蒽醌提取物含量達(dá)47.89%。
　　2.龍膽提取純化工藝的研究：以高效液相色譜法測(cè)定龍膽中龍膽苦苷的提

4、取量為指標(biāo)，通過(guò)對(duì)4種提取方法（冷浸法、溫浸法、超聲法、加熱回流提取法）的考察，確定最佳提取方法為加熱回流提取法；采用單因素試驗(yàn)，對(duì)提取粒度、提取溶媒、提取溫度等因素條件進(jìn)行考察，篩選最佳提取工藝參數(shù)；進(jìn)一步結(jié)合L9（34）正交試驗(yàn)的方法對(duì)龍膽提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳提取工藝為：70%的乙醇10倍量，提取3次，每次1小時(shí)；采用大孔吸附樹脂柱層析法對(duì)龍膽粗提物進(jìn)行純化，以龍膽苦苷的比吸附量及解吸率為指標(biāo)，考察7種類型大孔吸附樹脂的吸附與

5、解吸附性能，篩選確定純化龍膽有效部位提取物的最佳樹脂型號(hào)為SP700型，進(jìn)而通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合L9（34）正交試驗(yàn)的方法，對(duì)該樹脂的吸附特性和各影響因素進(jìn)行優(yōu)化，得出龍膽提取物的最佳純化工藝條件為：柱徑比9:1，上樣藥液質(zhì)量濃度0.1g/mL，以4BV/h的流速上樣135mL，用6BV量30%的乙醇進(jìn)行解吸附，以1BV/h的流速洗脫，龍膽粗提物經(jīng)SP700大孔吸附樹脂純化后，龍膽提取物中龍膽苦苷含量達(dá)49.84%。
　　3．大黃-

6、龍膽二者配伍提取對(duì)有效成分溶出量的影響：建立二極管陣列高效液相色譜法，同時(shí)測(cè)定大黃中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚和龍膽中龍膽苦苷六種有效成分的含量：采用Agilent反相C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-0.02%磷酸水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，270nm；在大黃、龍膽各最佳提取工藝條件下，將大黃-龍膽配伍提取，采用HPLC法檢測(cè)大黃中五種蒽醌類成分和龍膽中龍膽苦苷成分提取溶出的