減毒鼠傷寒沙門氏菌為載體的人呼吸道合胞病毒DNA疫苗免疫保護作用研究.pdf

1、目的：人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV)廣泛分布于世界各地，是導致嬰幼兒嚴重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚無特異性防治方法，世界衛(wèi)生組織將發(fā)展RSV疫苗列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項目之一。RSV的11種蛋白中，融合蛋白(Fusion Protein，F(xiàn))是中和抗原，免疫動物后，可以產(chǎn)生具有免疫保護作用的中和抗體，為新型疫苗候選抗原。本實驗中我們用減毒鼠傷寒沙門菌(Salmon

2、ella typhimurium aroA strain SL7207，SL7207)為載體攜帶能夠表達F蛋白的DNA疫苗，經(jīng)黏膜途徑，開展體內(nèi)免疫效果和免疫保護作用研究，以期更好了解該候選疫苗免疫生物學特征。 方法：本研究中我們將能夠表達RsV F蛋白的真核表達載體pcDNA3.1/F轉(zhuǎn)化到SL7207，構(gòu)建重組的減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F，同時用pcDNA3.1空載體做對照。分別于O、2、6周三次

3、口服免疫小鼠，通過體液免疫(IgG)、黏膜免疫(sIgA)、細胞免疫(CTL、T淋巴細胞增殖實驗)等指標分析免疫后小鼠RSV特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)生情況。最后，利用RSV病毒經(jīng)鼻腔攻擊小鼠，并分別于攻毒后3、5和7天處死小鼠進行肺組織病毒含量及肺組織病理學動態(tài)分析了解免疫保護作用的效果。 結(jié)果：取已轉(zhuǎn)化pcDNA3.1/F的SL7207并提取質(zhì)粒，經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析與預期一致。經(jīng)口服免疫BALB/c小鼠，與對照組相比，實驗組小鼠血清及

4、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage，BAL)中分別產(chǎn)生了有效的血清IgG及sIgA(p<0.01)，血清中抗體亞類分析顯示IgGl和IgG2a的比值為0.96。實驗組CTT反應(yīng)(P<0.01，效靶比值為100：1和50:1)和T淋巴細胞增殖實驗(p<0.05)均明顯增強。攻毒實驗中，病毒攻擊后3天和5天的小鼠肺部病毒載量，實驗組比對照組明顯降低(p<0.05)，組織病理學分析結(jié)果也顯示在炎性細胞浸潤和肺泡壁厚度方面

5、兩組有顯著性差異(p<0.01)。 結(jié)論：獲得的重組減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F，能夠刺激機體產(chǎn)生有效的體液免疫和細胞免疫及局部免疫，抗體亞類分析顯示誘導產(chǎn)生了Th1和Th2平衡的免疫應(yīng)答，沒有產(chǎn)生疾病增強作用，對RSv感染具有一定的免疫保護作用。因此我們認為以減毒傷寒沙門菌為載體的口服DNA疫苗兼具黏膜免疫及DNA疫苗的雙重優(yōu)點，是RSV等通過黏膜途徑感染的病毒疫苗研究的重要方向，為今后RSV疫苗免疫