十字花科黑腐病菌中二價(jià)陽(yáng)離子耐受蛋白編碼基因與DsbD蛋白的研究.pdf

1、拓?fù)鋵W(xué)研究揭示DsbD蛋白由三個(gè)結(jié)構(gòu)域組成：N端周質(zhì)空問(wèn)結(jié)構(gòu)域(αdomain)和C端的周質(zhì)空間結(jié)構(gòu)域（γdomain)以及八個(gè)跨膜的疏水核心(βdomain)。對(duì)Xcc8004中的DsbD蛋白進(jìn)行研究，在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，DsbD蛋白在c型細(xì)胞色素合成的代謝途徑中起著非常重要的作用，它是c型細(xì)胞色素合成的必經(jīng)途徑，同時(shí)參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成。為了研究該蛋白的生物學(xué)活性，本研究對(duì)DsbD蛋白的γdomain以及βdomain進(jìn)行表達(dá)，從

2、而研究它們的生物學(xué)活性，結(jié)果顯示單獨(dú)的γdomain并無(wú)氧化還原活性，βdomain的反應(yīng)催化速率也較其他硫氧還蛋白的催化速率要慢，因此推測(cè)DsbD蛋白要行使其正常生物功能，需要三個(gè)結(jié)構(gòu)域的存在。十字花科黑腐病菌(Xanthomonascampestrispv.campestris)Xcc8004中的DsbD蛋白由XC0531編碼，與其上游基因XC0532相隔5個(gè)堿基對(duì)，對(duì)于兩個(gè)基因的關(guān)系還不清楚，因此還要對(duì)XC0532進(jìn)行研究。根據(jù)基

3、因組的注釋，Xcc8004基因組中編號(hào)為XC0532的基因有可能編碼二價(jià)陽(yáng)離子耐受蛋白，為了進(jìn)一步了解XC0532的功能，本研究構(gòu)建了該基因的整合突變體和缺失突變體，并對(duì)突變體進(jìn)行分析。通過(guò)致病性分析和表型分析，發(fā)現(xiàn)該基因?qū)PS的合成及致病性無(wú)明顯影響，但是該基因的極性突變體的EPS產(chǎn)量與致病力較野生型有所下降，后通過(guò)RT-PCR證實(shí)XC0531和XC0532有共轉(zhuǎn)錄的關(guān)系。在二價(jià)離子耐受性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，XC0532突變后，菌株對(duì)Mn2