十字花科黑腐病菌六個小RNA的功能鑒定.pdf

1、RNA分為編碼RNA和非編碼RNA(英文全稱non-coding RNA，簡稱ncRNAs)。細菌中的非編碼RNA-般被稱為小RNA(簡稱sRNAs)，近年來細菌研究領(lǐng)域興起了對小RNA的探索熱潮，因為小RNA已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)對細菌的各種代謝過程甚至包括致病過程有重要的作用。本課題組致力于研究十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovarcampestris，簡稱Xcc)。其小RNA的鑒定工作目前已經(jīng)進展到了

2、一個重要階段。經(jīng)高通量測序(RNA-seq)以及Northern雜交驗證鑒定出來的小RNA數(shù)量達到100個左右。本工作的內(nèi)容是對其中六個小RNA-sRNA-Xcc19、sRNA-Xcc20、sRNA-Xcc21、sRNA-Xcc22、sRNA-Xcc23、sRNA-Xcc24的功能進行鑒定。
　　 為了研究這些小RNA的功能，我們擬通過這樣的技術(shù)路線：構(gòu)建它們的過量表達菌株和缺失突變體并進行表型分析。
　　 目前，我們完

3、成了這六個過量表達菌株以及一個缺失突變體的構(gòu)建，根據(jù)它們過量表達或者缺失的小RNA分別將其命名為OE19、OE20、OE21、OE22、OE23、OE24、DM19。然后以野生型Xcc8004以及Xcc8004p(導入空質(zhì)粒的對照菌株)為對照，對其進行了碳源利用、金屬離子耐受性、蛋白質(zhì)變性劑、胞外酶及胞外多糖、致病性、過敏性、游動性等多方面的多種表型分析。結(jié)果顯示，其中2個過量表達菌株和Xcc8004以及Xcc8004p相比在幾個方面分

4、別有較明顯的表型變化-OE23的胞外蛋白酶的分泌顯著下降了，同時其對Cu2+、Zn2+以及Cd2+和Ni2+以及蛋白質(zhì)變性劑SDS耐受能力下降，在營養(yǎng)缺乏條件下的生長能力低于Xcc8004以及Xcc8004p；OE24在營養(yǎng)缺乏條件下生長速度明顯低于Xcc8004以及Xcc8004p，值得關(guān)注其對寄主的致病力嚴重下降，幾乎消失；其他五個菌株的各種表型與Xcc8004以及Xcc8004p相比都沒有明顯的差異。sRNA-Xcc23和sRNA