Perlecan在大鼠牙囊發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)及意義.pdf

1、牙囊的發(fā)育是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，從胚胎期一直延續(xù)到出生以后，其間要經(jīng)過(guò)開(kāi)始發(fā)育、增殖、形態(tài)分化、基質(zhì)沉積、成熟等階段，最后才能形成牙周組織[1]。牙囊的發(fā)育和分化與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)、生長(zhǎng)因子和基底膜等因素非常密切?；啄ぶ饕鹬Ъ茏饔茫珽CM和生長(zhǎng)因子附著于基底膜，生長(zhǎng)因子作為誘導(dǎo)信號(hào)(inductivesignal)在上皮和間充質(zhì)之間的相互作用中起著重要作用。ECM在細(xì)胞的粘附、擴(kuò)散及移行

2、方面意義深遠(yuǎn)。串珠素(perlecan)作為重要的ECM蛋白，由核心蛋白和4 條硫酸肝素(heperinsulfate, HS)側(cè)鏈組成，與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblastgrowth factor, FGF)等生長(zhǎng)因子關(guān)系密切，在組織的發(fā)育過(guò)程中具有重要的意義。因?yàn)槠浞肿咏Y(jié)構(gòu)呈串珠狀，1991 年Hassell等將其命名為perlecan。 Perlecan作為ECM中的主要蛋白聚糖之一，可以作為一種穩(wěn)定基質(zhì)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞

3、-基質(zhì)相互作用的粘合劑，并介導(dǎo)生長(zhǎng)因子信號(hào)對(duì)細(xì)胞增生和分化起作用，顯示出結(jié)合基底膜蛋白的活性。其在骨、血管等器官發(fā)育過(guò)程中的作用已有報(bào)道。在牙囊發(fā)育過(guò)程中，perlecan是否有表達(dá)，還未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道[2]。 本實(shí)驗(yàn)采用出生后0 天、1 天、1 周、2 周的SD 大鼠各10 只，在腹腔麻醉下取其下頜第一磨牙及其牙囊組織，并制作標(biāo)本，運(yùn)用免疫組化、灰度測(cè)量等方法，觀察perlecan 在牙囊各發(fā)育時(shí)間段的表達(dá)。結(jié)果顯示，出生后各

4、時(shí)間組大鼠牙囊組織中perlecan 均為陽(yáng)性表達(dá)，主要分布在細(xì)胞周圍的基質(zhì)中。出生0 天，成釉器與牙乳頭間的基底膜、內(nèi)釉和外釉上皮呈陽(yáng)性表達(dá)，牙囊組織有陽(yáng)性信號(hào)；出生1 天，成釉器進(jìn)一步發(fā)育，基底膜、外釉、牙囊、牙乳頭細(xì)胞均有陽(yáng)性表達(dá)；出生1 周，內(nèi)釉上皮細(xì)胞開(kāi)始分化為成釉細(xì)胞，牙本質(zhì)細(xì)胞尚未形成，成釉細(xì)胞、牙囊細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)；出生后2 周，釉基質(zhì)、牙本質(zhì)已形成，牙囊組織開(kāi)始形成牙骨質(zhì)、牙槽骨，成釉細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)。灰度測(cè)量結(jié)果采用重復(fù)

5、測(cè)量的方差分析。 分析結(jié)果表明，1 天組、1 周組分別與0 天組、2 周組有明顯差別(P<0.05)；而1 天組、1 周組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；0 天、2 周之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 運(yùn)用熒光雙標(biāo)perlecan 與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblaastgeowth factor, bFGF)，在激光掃描共聚焦顯微鏡(1aser scanning confocalmicrosco

6、pe, LSCM)下觀察perlecan 與bFGF 在牙囊組織發(fā)育過(guò)程中的分布，perlecan 與bFGF 在大鼠牙囊發(fā)育過(guò)程中呈先后不同時(shí)相的表達(dá)，染色主要為牙囊細(xì)胞（鐘狀晚期）及牙骨質(zhì)牙槽骨內(nèi)側(cè)（硬組織形成期）。Perlecan主要分布在牙囊細(xì)胞周圍基質(zhì)中，在造釉器中高度表達(dá)，牙囊細(xì)胞的高表達(dá)區(qū)主要集中在小血管周圍；bFGF 在牙囊細(xì)胞內(nèi)外均有表達(dá)，在硬組織形成期， bFGF 的高表達(dá)區(qū)主要集中在牙骨質(zhì)和牙槽骨。0 天組、1 天

7、組、1周組perlecan 陽(yáng)性表達(dá)程度逐漸增強(qiáng)，perlecan 的陽(yáng)性程度表達(dá)高于bFGF；2 周組perlecan 陽(yáng)性表達(dá)程度有所下降，bFGF 的陽(yáng)性程度表達(dá)高于perlecan；0 天組、1 天組、1 周組、2 周組bFGF 陽(yáng)性表達(dá)程度逐漸增強(qiáng)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 1. 完成了對(duì)bPerlecan 基因的正確克隆和表達(dá)，建立了可以表達(dá)bPerlecan的組織工程菌。 2. Perlecan 與牙囊的發(fā)育有