TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受體在大鼠全胚及心、肝、肺、腎發(fā)育過程中的表達(dá).pdf

1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor beta，TGFβ)是一組具有多種功能的細(xì)胞因子，它廣泛參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的眾多生物學(xué)作用，同時(shí)在胚胎生長(zhǎng)，器官發(fā)育中也發(fā)揮著極其重要的功能。TGFβ1是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子家族中的一個(gè)亞型，它與妊娠的維持和胚胎的正常發(fā)育密切相關(guān)。TGFβ1通過與細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)作用，其中與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β型受體Ⅰ和受體Ⅱ(transforming growth factor be

2、taⅠ、Ⅱ type receptor，TβRⅠ、TβRⅡ)共同構(gòu)成配體一受體三元復(fù)合物，該三元復(fù)合物是實(shí)現(xiàn)TGFβ1胞內(nèi)效應(yīng)的關(guān)鍵。 本次試驗(yàn)研究首先運(yùn)用了半定量RT-PCR的技術(shù)方法。為盡量保證PCR反應(yīng)是在平臺(tái)期前的線性范圍內(nèi)進(jìn)行，在行該檢測(cè)方法時(shí)運(yùn)用了逐步測(cè)試并結(jié)合BIO-RAD Quantity One軟件進(jìn)行每一輪的分析，從而確定各個(gè)因子PCR反應(yīng)的循環(huán)參數(shù)。為避免誤差，每確定一個(gè)因子的循環(huán)次數(shù)時(shí)重復(fù)該實(shí)驗(yàn)步驟3次。

3、發(fā)現(xiàn)三個(gè)因子的半定量RT-PCR循環(huán)次數(shù)均為28次。將β-actin與待擴(kuò)因子放在同一管中擴(kuò)增時(shí)設(shè)計(jì)了競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)β-actin與TGFβ1、β-actin與TβR Ⅰ、β-actin與TpRⅡ在同一管反應(yīng)體系中都可以擴(kuò)增出良好的電泳條帶?；谏鲜龅膶?shí)驗(yàn)理論，我們運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)最后初步檢測(cè)了TGFβ1及TβR Ⅰ與TβRⅡ在13～17d SD大鼠胚胎全胚中的表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)TGFβ1在13～16 d中表達(dá)是逐漸增加的，其

4、中15 d，16 d是高峰，17 d明顯下降；TpR Ⅰ與TβRⅡ在該發(fā)育階段的表達(dá)總趨勢(shì)為遞增，其中大約在17 d二者都出現(xiàn)表達(dá)的高峰。在15～17 d中三個(gè)因子的整體變化最大，故將組織學(xué)與免疫組化的多數(shù)觀察時(shí)點(diǎn)選在15～17 d。其后，本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察上述三個(gè)因子在SD胎鼠15～17 d中于心、肝、肺、腎等不同組織器官內(nèi)的時(shí)空表達(dá)特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)TGFβ12和TβRⅠ、 TβRⅡ在心發(fā)育13～17 d中都有較強(qiáng)的陽(yáng)性顆粒出

5、現(xiàn)，且不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)的表達(dá)程度基本一致。唯獨(dú)在瓣膜結(jié)構(gòu)處三個(gè)因子的表達(dá)一直為陰性。13～17 d中，肝實(shí)質(zhì)內(nèi)的TGFβ`無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，而TβRⅠ和TβRⅡ隨肝臟的發(fā)育出現(xiàn)動(dòng)態(tài)性的改變，前者的表達(dá)量逐漸增加而后者則逐漸減少。腎臟內(nèi)TβRⅠ砒出現(xiàn)的最早，TGFβ1和TβRⅡ出現(xiàn)的時(shí)間基本一致；TβRⅠ與TβRⅡ在腎內(nèi)的表達(dá)情況大致相似而TGFβ1的表達(dá)僅局限于管腔狀結(jié)構(gòu)的上皮細(xì)胞內(nèi)。15～17 d中，肺間充質(zhì)細(xì)胞TGFβ1的表達(dá)是隨胎齡的增加而

6、增加，TβR Ⅰ在表達(dá)上無(wú)明顯改變，TβRⅡ的表達(dá)先增加后降低；相同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，三個(gè)因子在肺內(nèi)終蕾柱狀上皮內(nèi)的陽(yáng)性表達(dá)都表現(xiàn)為先增加后降低的趨勢(shì)。 總之，TGFβ1與TβR Ⅰ、TβRⅡ隨著大鼠胚胎的發(fā)育，不同組織部位有著不同時(shí)相性的表達(dá)規(guī)律。這讓我們認(rèn)識(shí)到TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)通路在胚胎發(fā)育過程中的重要性，同時(shí)TβR Ⅰ、TβRⅡ與TGFβ1的表達(dá)不一致性也讓我們推測(cè)TβR Ⅰ、TβR Ⅱ在與TGFβ1組成信號(hào)通路之外也許有自身獨(dú)立的