烏司他丁對膿毒癥患者的治療作用及其機制的研究.pdf

1、膿毒癥是有多種感染因素引發(fā)的，以全身性炎癥反應為主的一類嚴重綜合征。膿毒癥、膿毒癥休克是導致危重癥病人死亡的一個重要因素。近幾年對膿毒癥的生理病理機制，以及臨床的診斷治療都有很多相關的探討。然而膿毒癥的患病率和病死率仍然是非常高。大量文獻報道氧化應激對膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展進程存在重大影響。烏司他丁(UTI)是一類蛋白酶抑制劑（尿液中提取），可以抑制多種蛋白和水解酶的活性，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡及信號調節(jié)作用。前期臨床試驗發(fā)現這些藥物能改

2、善膿毒癥病人的治療效果，但其作用尚不明確。
　　目的：
　　評估UTI對膿毒癥病患的治療效果，并通過檢測受試者血清中氧化物質的濃度的改變來研究其中的作用機制，在細胞水平進一步探究UTI對脂多糖內毒素(LPS)誘導的人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)的保護作用及其分子作用原理。
　　方法：
　　(1)將40例符合膿毒癥的診斷標準的納入者，嚴格按照隨機化分配原則歸為對照組(n=20)，烏司他丁組(n=20)。并選取10

3、名正常體檢者，為本次實驗的正常組的納入者。對照組給予的治療嚴格按照膿毒癥的診療規(guī)范，烏司他丁組除了采用對照組的基礎治療外另給予靜脈注射烏司他丁10萬U q8h，連用7天。在治療前和治療后的第4、8天抽取靜脈血，用來檢測血清中的氧化產物丙二醛(MDA)，以及用來檢測超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化物質的變化。正常組在體檢時抽得靜脈血，檢測結果作為本實驗的正常組。常規(guī)監(jiān)測患者的T（體溫）、RR（心率）、P

4、R（呼吸頻率）、WBC（白細胞計數），并統(tǒng)計患者機械通氣的時間，在ICU的住院時間，以及患者的28d生存率。
　　(2)在臨床研究的基礎上，利用脂多糖誘導體外人臍靜脈內皮細胞(HumanUmbilical VeinEndothlial Cells，HUVECs)，構建氧化應激損傷模型，根據脂多糖的濃度梯度實驗和時間梯度實驗，分別選擇10ug/ml的藥物濃度，24h的處理時間定為制作HUVEC氧化應激模型的實驗濃度和實驗時間，針對烏

5、司他丁保護作用的濃度梯度實驗選取100U/ml的濃度當作實驗的有效作用濃度。細胞實驗分為空白對照組、UTI組、LPS組、UTI+LPS組、SP600125+LPS組，UTI+Y60025+LPS組。細胞的存活率的檢測選擇一種常用的方法（MTT方法），MDA、GSH-Px試劑盒檢測MDA、GSH-Px的產生，用Western blot的方法檢測SOD、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun等蛋白的表達，進一步探討UTI對LPS誘導

6、的HUVECs損傷是否存在有效的保護作用。應用LPS誘發(fā)血管內皮細胞損傷，探討UTI通過JNK/c-Jun信號轉導通路來對抗氧化應激。
　　結果：
　　(1)烏司他丁組患者的RR（心率）、PR（呼吸頻率）、T（體溫）、WBC（白細胞計數）、PCT（降鈣素原）、CRP（C反應蛋白）、Lac（乳酸水平）治療后改善情況均優(yōu)于對照組。兩組患者治療前血清中的MDA的含量與正常組相比較明顯升高，而血清中的SOD、GSH-Px與正常組相比

7、較明顯降低。UTI組患者治療后較治療前血清中的MDA有所降低，治療后第8天與治療前差異存在顯著性(p＜0.05)。SOD較治療前有所升高的，治療后第8天與治療前差異存在顯著性(p＜0.05)。GSH-Px較治療前有所升高的，治療后第4天和第8天與治療前差異存在顯著性(p＜0.05)。而對照組治療后各過氧化物指標水平無明顯變化，治療前后差異無顯著性。治療前，烏司他丁組和對照組各指標差異無顯著性(p＞0.05)。開始治療以后第4天，烏司他丁

8、組和對照組各指標有差異，但不存在統(tǒng)計意義(p＞0.05)。治療開始后第8天兩組病人的各指標之間差異存在統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。UTI組機械通氣時間、ICU住院天數少于對照組，而28d生存率出現相反趨勢。
　　(2)在細胞水平，我們發(fā)現LPS刺激后，細胞內的MDA濃度升高，而GSH-Px活力降低，SOD蛋白表達的水平降低，細胞內ROS產生明顯增多。UTI處理后可以明顯逆轉LPS誘導內皮細胞產生的這種效應。UTI可以抑制LPS對內

9、皮細胞刺激引起的JNK/c-Jun的磷酸化。用JNK通路抑制劑SP600125以后，LPS的氧化應激作用明顯減弱，JNK、c-Jun的蛋白的磷酸化水平減弱，蛋白的表達降低。
　　結論：
　　(1)UTI能夠改善膿毒癥患者的病情，降低患者機械通氣的時間，縮短病患在ICU的住院天數，還能夠提高患者28d生存率。作用機制與降低氧化應激損傷有關。
　　(2)我們的研究結果還顯示，烏司他丁可以明顯抑制脂多糖對臍靜脈內皮細胞的氧化